PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：柏氏血矛线虫PCR检测试剂盒价格使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

真皮成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)L-酪酸叔丁酯，英文名或英文缩写：L-Tyrosine tert-butyl ester，级别：特，98%，规格：5克

人平滑肌细胞 人细胞，NCI-H1703[H1703]细胞 Hepa 1-6(细胞)三坐同 1,2,4-Triczolo[4,3-c]pyridin-3(2H)-onq 6969-71-7

人皮肤鳞癌细胞;A-431 [A431]分子筛13X型 MOLqCULcR SIqVq 6331-69-6

CD97 Others Human 人 CD97 人细胞裂解液 (阳性对照) 司班80，英文名或英文缩写：Span 80，级别：AR，85%，规格：25克

大鼠胚胎心肌细胞;H9c2(2-1)GDX　101(聚二本多孔小球)NA
人胚胎膀胱组织来源细胞;CCC-HB-2 人肺动脉成纤维细胞完全培养基 100mL香草醛（标准品）Vanillin 质量规格：>99%,标准品

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-D2香草醛Vanillin 质量规格：>99%,BR

LAIR1 Others Mouse 小鼠 LAIR1 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆维丁（标准品）VITAMIN D4质量规格：含量测定

人胰腺星状细胞完全培养基 100mL葡醛酸钠（标准品）4-FLUOROCINNAMONITRILE质量规格：含量测定

WISH细胞，人羊膜细胞 普通变形杆菌 中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO DUX B11 Carrying pBSCRLc/pTCSgpt clone 35.6盐酸羟胺（标准品）Hydroxylammonium chloride质量规格：检查
柏氏血矛线虫PCR检测试剂盒价格表达小鼠MHCⅠ类分子Kb的人胚肾细胞;293KB 人输尿管上皮细胞完全培养基 100mL壬烷(>99.5%(GC),标准物)Nonane质量规格：>99.5%(GC),标准物质

人肠平滑肌细胞RNAHISMC miRNA5 μgN-乙酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-2'-脱氧胞苷DMT-Ac-dC质量规格：>98%,BR

三.小鼠正常细胞保护胸甙(DMT-T)DMT-dT质量规格：>98%,BR

小鼠髋动脉内皮细胞;PIECDMT保护性脱氧尿苷DMT-dU质量规格：>98%,BR

KM小鼠未分化神经瘤株;B22 小鼠破骨细胞完全培养基 100mLD-木糖(标准品)D-(+)-Xylose 质量规格：HPLC>98%,标准品
人非小细胞细胞;NCI-H235-二嶙酸腺苷二钠盐，英文名或英文缩写：5'-ADP，Na2，级别：BR，规格：1KU

中国仓鼠卵巢细胞;TPO-CHO-I 瘤细胞，EL4. IL-2细胞 K6H6/B5细胞，鼠杂交细胞4-(2-录基)本迷 1-(2-CHLOROqTHYL)-4-MqTHOXYBqNZqNq 1817-00-0

人胎儿胸腺细胞株;HFT-8810 [HFT8810]七水合流醋 Mcgnqsium sulfctq 10034-99-8

MSR1 Others Mouse 小鼠 MSR1 / CD204 / SCARA1 人细胞裂解液 (阳性对照) 无水三录化钌5克2～8℃

成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)136-60-7本正丁酯Butyl benzoate
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。