PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：嗜血杆菌PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

肠粘膜上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)D-葡萄糖醛酸-r-内酯，英文名或英文缩写：D-Glucurone，级别：BR，98%，规格：1克

人海马神经元 人细胞，NCI-H226[H226]细胞 P388D1(瘤细胞)(S)-(+)-同洛芬 (S)-(+)-Kqtoprofqn 161-81-2

人色素瘤细胞;A875L-溶血卵鳞脂(冷藏运输) Lysophosphctidylcholinq 9008-30-4

AXL Others Mouse 小鼠 Axl Kinase 人细胞裂解液 (阳性对照) CAPSOFREEACIDCAPSO超级25G73463-39-5RT

大鼠脑细胞;C64975-73-9N,N’-二环己基-4-吗啉脒N,N'-Dicyclohexyl-4-morpholinecarboxamidine
人颅骨造骨细胞 (HCO) ( 5×105 ) NRK-52E，大鼠肾细胞 Rattus芴甲氧羰酰氯（Fmoc-Cl）Fmoc chloride质量规格：用于HPLC衍生化,≥99.0% (HPLC)

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-B5氟罗里硅土(农残级)Florisil®质量规格：农残级

人小脑颗粒细胞 (HCGC)( 5×105 )合成硅酸镁吸附剂(250-125um)Magnesium silicate adsorbent(Synthetic)质量规格：250-125um

Ⅱ型肺泡上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)吡氟禾草灵标准溶液(0.101mg/ml)Fluazifop-P-butyl solution质量规格：0.101mg/ml

人髓母细胞瘤细胞;D341Med 大鼠子宫内膜上皮细胞完全培养基 100mL恶唑酮菌(标准品) Famoxadone solution质量规格：分析标准品,98.5%
嗜血杆菌PCR检测试剂盒说明书人胚胎成纤维样细胞;HEH2 人子宫成纤维细胞完全培养基 100mL2'-脱氧鸟苷-3'-单1酸二钠2'-Deoxy-3'-guanylic acid di salt质量规格：>98%,BR

人表皮角质细胞-新生HEK-nN-乙酰-DL-甲硫氨酸N-Acetyl-DL-mine质量规格：0.99

RK2 Others Rat 大鼠 kB / RK2 人细胞裂解液 (阳性对照) DL-高半胱氨酸DL-Homocysteine 质量规格：0.95

大鼠直肠平滑肌细胞完全培养基 100mL间氟-DL-酪氨酸m-Fluoro-DL-tyrosine 质量规格：0.99

BHK-21 [C-13]仓鼠肾成纤维细胞 BHK-21 [C-13] hamster kidney fibroblast cells MEM培养基10%FBS钙蛋白酶抑制剂I(进口)Calpain Inhibitor I(ALLN) 质量规格：≥95%,美国进口
tTA基因修饰的小鼠(B类);P19-CAG-tTA-1D3 胶原酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL3'-对羟基紫杉醇质量规格：美国进口3'-p-Hydroxy Paclitaxel

SK-MEL-1, 人皮肤色素瘤细胞 Human紫杉醇-d5质量规格：美国进口Paclitaxel-d5

BCHE Others Human 人 BCHE / CHE1 人细胞裂解液 (阳性对照) 7-差向紫杉酚质量规格：美国进口7-epi-Taxol

人小气道上皮细胞RNAHSAEpiC miRNA5 μg紫杉醇C质量规格：美国进口Paclitaxel C

SEMA5A Others Human 人 SEMA5A / Semaphorin-5A / SEMAF 人细胞裂解液 (阳性对照) 2'-O-(tert-Butyldimethylsilyl)-6α-羟基-7-差向-紫衫醇质量规格：美国进口2'-O-(tert-Butyldimethylsilyl)-6α-hydroxy-7-epi-paclitaxel
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。