PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：副鸡嗜血杆菌PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

PRSS8 Others Mouse 小鼠 Prostasin / PRSS8 (aa 30-289) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 血清兔抗FITC1公斤RT

CL-0009769-P(人肾细胞腺癌细胞)5×106cells/瓶×23--1,2,4-三氮坐 1H-1,2,4-Triczolq-3-thiol

B16-F10, 小鼠色素瘤高转移细胞 皮肤色素瘤细胞,SK-HEL-1细胞 HCCLM3(细胞)PIPESwo7iumSALTPIPES, Na*白色精细结晶粉末RTsigma

小鼠细胞(分泌促生长激素分泌激素);AtT-20L-HISTIDINEMONOxy7noCHLORIDEMONOHYDRATEL-组酸盐酸盐美国食品化学品法典级白色粉末RTsigma

FCGR1 Others Human 人 CD64 / FCGR1A 人细胞裂解液 (阳性对照) 异亚丙基MESITYL OXIDE
人结直肠腺癌细胞;HCT-8 [HRT-18]三乙酰基-β-环糊精(>97.0%(HPLC))Triacetyl-β-cyclodextrin质量规格：>97.0%(HPLC)

FGFRL1 Others Mouse 小鼠 FGFRL1 / FGFR5 人细胞裂解液 (阳性对照) 10,12-二十七二炔酸(>98.0%(GC))10,12-Heptacosadiynoic Acid质量规格：>98.0%(GC)

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-A52,4-十七二炔酸(>95.0%(T))2,4-Heptadecadiynoic Acid质量规格：>95.0%(T)

BAMBI Others Mouse 小鼠 BAMBI / NMA 人细胞裂解液 (阳性对照) 2,4-二十一二炔酸(>95.0%(T))2,4-Heneicosadiynoic Acid质量规格：>95.0%(T)

人胰腺上皮细胞完全培养基 100mL10,12-十七二炔酸(>97.0%(T))10,12-Heptadecadiynoic Acid质量规格：>97.0%(T)
副鸡嗜血杆菌PCR检测试剂盒供应小鼠前低转移细胞(绿色荧光蛋白标记);MFC-B5-GFPN-十八烷酰-D-鞘氨醇N-Stearoyl-D-Sphingosine质量规格：美国进口

ALCAM Others Mouse 小鼠 ALCAM / CD166 人细胞裂解液 (阳性对照) N-去异丁基-N-丙基利福布汀N-Desisobutyl-N-propyl Rifabutin质量规格：美国进口

人表皮色素细胞-中色素裂解物HELM-m L25-去乙酰基利福喷汀25-Desacetyl Rifapentin质量规格：美国进口

CD83 Others Rat 大鼠 CD83 人细胞裂解液 (阳性对照) 利鲁唑-13C,15N2Riluzole-13C,15N2质量规格：美国进口

人脑成纤维细胞完全培养基 100mLN-羟基利鲁唑N-Hydroxy Riluzole质量规格：美国进口
SL-7细胞，胚肺细胞 人上皮细胞,RWPE2细胞 人上皮细胞;MCF-10A聚乙酸酯shēng huà shì jì容量：RT50克

鱼源细胞2,4,5-三拂本安 2,4,5-Trifluorocnilinq 367-34-0

DPP4 Others Human 人 DPPIV / DPP4 / CD26 人细胞裂解液 (阳性对照) 卫矛醇半固体琼脂shēng huà shì jì容量：2～8℃100毫升

人卵巢表层上皮细胞HOSEpiC缓冲MUG琼脂shēng huà shì jì容量：25毫升

PVRL1 Others Rat 大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 112-12-92-十一(烷)酮2-Undecanone
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。