【产品名称】: 三代虫PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Gyrodactylus salarisPCR
【货号】: BKP3750

【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

三代虫PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

DDR1 Others Rat 大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人细胞裂解液 (阳性对照) ChloramineTtrihydrate录亚明T100毫克超，99%

人羊膜细胞;HA单炳同-D-葡萄糖 1,2-O-Isopropylidqnq-D-glucofurcnosq 18249-40-1

SW-13细胞，人肾上腺皮质腺癌细胞 猪细胞系(ST),ST细胞 CL-0422RBL-1(大鼠嗜碱性粒细胞性细胞)5×106cells/瓶×2言醋摸西沙星 Moxifloxccin xy7nochloridq 18686-86-8

D283 Med(人脑髓母细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×25-肌苷二嶙酸三钠盐50克RT

hMo-PB-c single donor 人类外周血细胞来源的单核细胞， 10 million 人成纤维细胞-心室HCF-av(Bis-Acrylamide双酰胺)
人葡萄膜色素细胞;UM四甲基锡(>96.0%(GC))Tetramethyltin质量规格：>96.0%(GC)

THPO Others Cynomolgus 食蟹猴 Thrombopoietin / THPO / TPO 人细胞裂解液 (阳性对照) 二氯二茂锆(>97.0%(T))Zirconocene Dichloride质量规格：>97.0%(T)

食管平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)Chirabite-AR[用于核磁共振]Chirabite-AR质量规格：用于核磁共振

DMP1 Others Human 人 DMP1 人细胞裂解液 (阳性对照) 三(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)镨(III)(＞98%(T))Tris(2,2,6,6-tetramethyl-3,5-heptanedionato)praseodymium(III) 质量规格：＞98%(T)

NRK-52E 大鼠肾细胞三(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮酸)铕(III)(＞95%(T))Tris(2,2,6,6-tetramethyl-3,5-heptanedionato)europium(III)质量规格：＞95%(T)
人绒癌细胞;JEG-34-叔丁基杯[4]芳烃-O,O',O'',O'''-四乙酸四乙酯(>96.0%(HPLC))Tetraethyl 4-tert-Butylcalix[4]arene-O,O',O'',O'''-tetraacetate质量规格：>96.0%(HPLC)

PPIB Others Human 人 PPIB / CYPB 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-叔丁基硫杂杯[4]芳烃(>98.0%(HPLC))4-tert-Butylthiacalix[4]arene质量规格：>98.0%(HPLC)

家猫肺细胞;FCA-L14-对乙酰氨基酚硫酸钾盐4-Acetaminophen Sulfate Potassium Salt质量规格：美国进口

SELE Others Mouse 小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 人细胞裂解液 (阳性对照) 4-对乙酰氨基酚硫酸盐-d34-Acetaminophen-d3 Sulfate质量规格：美国进口

CL-0101Hela(人细胞)5×106cells/瓶×23-(N-乙酰-L-半胱氨酸-S-基)对乙酰氨基酚钠盐3-(N-Acetyl-L-cystein-S-yl) Acetaminophen  Salt质量规格：美国进口
三代虫PCR检测试剂盒说明书肾系膜细胞培养基MCM-prf4-(三氟甲基)烟酰胺质量规格：美国进口4-(Trifluoromethyl)nicotinamide

CDC42BPB Others Human 人 CDC42BPB 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 1-甲基-烟酰胺化物质量规格：美国进口1-Methyl-nicotinamide Iodide

人正常基质永生化细胞;WPMY-1烟酰胺-2,4,5,6-d4质量规格：美国进口Nicotinamide-2,4,5,6-d4

P388D1细胞，瘤细胞 人腺癌细胞,HCT-8细胞 CM-H020人胰岛β细胞完全培养基100mLN-(羟甲基)烟酰胺质量规格：美国进口N-(Hydroxymethyl)nicotinamide

大鼠骨骼肌成肌细胞;L6β-萘酚,异萘酚质量规格：AR2-Naphthol
PCR检测试剂盒

三代虫PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。