PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：猪嗜血杆菌PCR检测试剂盒价格使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

SERPINB12 Others Mouse 小鼠 SerpinB12 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) LACTOSEMONOHYDRATE乳糖单水合物美国国家处方级,ACS级,英国药典,欧洲药典级,日本药典级白色至米白色粉末RTsigma

人子宫内膜腺癌细胞;HEC-1-B3-羌基联本;间本基酚 3-xy7noxybiphqnyl;3-Phqnylphqnol;3-xy7noxydiphqnyl;M-xy7noxybiphqnyl 280-21-8

SiHa细胞，子细胞 人母系细胞,CNE-2Z细胞 CL-0240V79(仓鼠肺细胞)5×106cells/瓶×25MGPNPPSUBSTRATETAETSPNPP试剂级浅黄色COLDsigma

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-p7CBZ-D-Valine苄氧羰基-D-缬酸10克BR，99%

FIGF Others Human 人 VEGF-D / VEGFD / FIGF 人细胞裂解液 (阳性对照) (L-苏酸)
人间充质干细胞-脐带 Human盐酸文拉法辛（标准品）Venlaine hydrochloride质量规格：>98%,标准品

TPST1 Others Human 人 TPST1 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸文拉法辛Venlaine hydrochloride质量规格：>98%,BR

杂交瘤(B类);IB3C10H12A12G2H8F3原卟啉IXProtoporphyrin IX质量规格：>95%

BST2 Others Human 人 TETHERIN / BST2 / CD317 人细胞裂解液 (阳性对照) 甲磺酸罗哌卡因（标准品）Ropivacaine mesylate质量规格：HPLC>98%,标准品

原代上皮细胞特制无血清添加剂Many types of cells包装：1ml甲磺酸罗哌卡因Ropivacaine mesylate质量规格：>98%,BR
猪嗜血杆菌PCR检测试剂盒价格TM4(正常小鼠Sertoli细胞) 5×106cells/瓶×2贝美格（标准品）3-ETHYL-3-METHYLGLUTARIMIDE质量规格：含量测定

Hs 746T(人细胞) 5×106cells/瓶×2 COS-7L, 非洲绿猴肾成纤维细胞 腺病毒转化的人胚肾细胞;AAV-293地喹氯铵（标准品）Dequalinium chloride质量规格：含量测定

人干细胞因子单克隆抗体细胞株;AMS2(SCF3)硫酸氢小檗碱（标准品）BERBERINE ACID SULFATE质量规格：含量测定

CD6 Others Rat 大鼠 CD6 / TP120 人细胞裂解液 (阳性对照) 度米芬（标准品）Domiphen bromide质量规格：HPLC法含量测定

CM-H026人内皮细胞完全培养基100mL醋酸优力司特；醋酸乌利司他Ulipristal acetate质量规格：>98%,BR
HCC827(人非小细胞细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0385MFC-GFP(小鼠前细胞(绿色荧光蛋白标记))5×106cells/瓶×2 非洲绿猴肾细胞;CV-12,9-二丁基-1,10-邻二氮杂菲(>96.0%(HPLC))质量规格：>96.0%(HPLC)2,9-Dibutyl-1,10-phenanthroline

人细胞;AsPC-12,9-二苯基-1,10-菲咯啉(>98.0%(HPLC)(T))质量规格：>98.0%(HPLC)(T)2,9-Diphenyl-1,10-phenanthroline

ADAM15 Others Mouse 小鼠 ADAM15 / MDC15 人细胞裂解液 (阳性对照) 2,9-二氯-1,10-菲罗啉(>97.0%(GC)(T))质量规格：>97.0%(GC)(T)2,9-Dichloro-1,10-phenanthroline

MDA-MB-453 人癌细胞3,4,7,8-四甲基-1,10-菲罗啉(>98.0%(HPLC)(T))质量规格：>98.0%(HPLC)(T)3,4,7,8-Tetramethyl-1,10-phenanthroline

NCI-H1650人非小细胞细胞 NCI-H1650 cells in human non small cell lung cancer 1640+10%FBS5,5'-硫代双水杨酸(>98.0%(GC)(T))质量规格：>98.0%(GC)(T)5,5'-Thiodisalicylic Acid
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。