【产品名称】: 哈扎拉病毒PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Hazara VirusRTPCR
【货号】: BKP3774

【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

哈扎拉病毒PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

人尿道上皮细胞(HUC)(5×105) 人羊膜上皮细胞 Human坚牢红盐，英文名或英文缩写：Fast red GG salt，级别：高，65%，苹果来源，规格：1克

大鼠胰岛β细胞瘤细胞;RIN-m5F(S)-(-)-叔丁基亚磺酰安 (S)-(-)-2-Mqthyl-2-propcnqsulfincmidq 343338-8-3

HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) L-酪安醋;;;L-β-队羌本基-α-安基炳醋;L-干酪安基醋 L-Tyrosinq;(S)-2-cMino-3-(4-xy7noxyphqnyl)propionic ccid;3-(4-xy7noxyphqnyl)-L-clcninq;L-α-cMino-β-p-xy7noxyphqnylpropionic ccid;L-α-cMino- p-xy7noxyxy7nocinncMic ccid 60-18-4

T-107A中性蛋白酶(含10mL酶解缓冲液)1mLGENEPAGEPLUS5.25%6MUREA*CLDPAK5.25% GENE PAGE PLUS, 6M 尿素生物技术级500MLCOLD

HEp-2细胞，人喉表皮样癌细胞 人脐内皮细胞,HUVE-12/CRL2480细胞 叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-2162778-12-5N，N-二甲基对本草酸盐N,N-Dimetxyl-1,4-pxenylenediamine oxalate
人成纤维细胞完全培养基 100mL烟酸乙酯(>98%,BR)Ethyl nicotinate质量规格：>98%,BR

HS-4细胞，人细胞系 鼠伤寒沙门氏菌Ta97 杂交瘤(B类);Z172A4C4C6F3G12二茂铁Ferrocene质量规格：>98%

XCL1 Protein Canine 重组狗 XCL1 蛋白 (His 标签)反苯环丙胺盐酸盐；单胺氧化酶(MAO)抑制剂Tranylcypromine (2-PCPA) HCl质量规格：>97%,单胺氧化酶(MAO)抑制剂

ME-180(人子宫颈表皮癌细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IL1RL1 / ST2 人细胞裂解液 (阳性对照) 黄胺酸(>96.5%，BS)Flavianic acid hydrate质量规格：>96.5%，BS

叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21酸性品红钙(>60%，BS)Fuchsin acid calcium salt质量规格：>60%，BS
C57BL/6小鼠骨髓间质干细胞 C57BL/6 mouse bone marrow mesenchymal stem cellsAc-YVAD-肽核酸Ac-YVAD-pNA质量规格：>95%,BR

HME6细胞，人色素瘤细胞 动物双歧杆菌 EB病毒转化的人B细胞;KMY0919β-丙内酯(>95.0%(GC)(T))β-Propiolactone质量规格：>95.0%(GC)(T)

UMR-106(大鼠细胞) 5×106cells/瓶×2DL-丙交酯(>98.0%(T))DL-Lactide质量规格：>98.0%(T)

Hut-102(人皮肤T瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 SKOV3/Taxol-25, 人紫杉醇耐药细胞株 EB病毒转化的人B细胞;KMY1022L-(-)-交酯(>98.0%(T))L-(-)-Lactide质量规格：>98.0%(T)

人恶性非霍奇金瘤患者的自然杀伤细胞;NK-92 [NK92]δ-戊内酯(>98.0%(GC))δ-Valerolactone质量规格：>98.0%(GC)
哈扎拉病毒PCR检测试剂盒说明书615小鼠网织细胞性瘤株;L615 小鼠肾足突细胞完全培养基 100mL10-脱乙酰巴卡亭质量规格：>98%,BR10-Deacetylbaccatin III

人绒毛膜内皮细胞 Human维生素B1(标准品)质量规格：HPLC≥99%，标准品vitamin B1

EFNA2 Others Mouse 小鼠 EFNA2 / Ephrin-A2 人细胞裂解液 (阳性对照) 维生素B1质量规格：>99%,USPVitamin B1

人无色素睫状上皮细胞HNPCEpiC维生素B12(标准品)质量规格：HPLC≥99%，标准品vitamin B12

NOV Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV Baculovirus-Insect cells ansfected Lysate (positive corol) (denatured)10-十一炔-1-醇(>95.0%(GC))质量规格：>95.0%(GC)10-Undecyn-1-ol
PCR检测试剂盒

哈扎拉病毒PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。