PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：44，同人病毒4型PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

肺动脉成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)D-山梨醇shēng huà shì jì容量：25克

Spike Others MERS-CoV 中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S1 (aa 1-725) 人细胞裂解液 (阳性对照) 言醋-4，4-联 4,4'-DIPYRIDYL DIxy7noCHLORIDq 796-7-3

人结直肠腺癌细胞;Caco-2DL-2-基shēng huà shì jì容量：1公斤

293T细胞，SV40永生化的人胚肾上皮细胞 蚊子细胞,C6/36细胞 CL-0250801-D (人巨细胞性细胞)5×106cells/瓶×2三嶙酸脱氧核糖核苷酸shēng huà shì jì容量：RT50克

ZR-75-1(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2613-45-62.4-二甲氧基2,4-Dimetxoxy
U-937细胞，组织细胞瘤细胞 低分化细胞系,SUNE-1细胞 CL-03142V6.11(人胚肾细胞)5×106cells/瓶×2盐酸双环胺（标准品）DICYCLOMINE HYDROCHLORIDE质量规格：供TCL鉴别用

叙利亚仓鼠细胞系;Syrian Hamster AV12氯解1定（标准品）2-Pyridinealdoxime methochloride质量规格：HPLC法含量测定

MBL1 Others Mouse 小鼠 MBL1 人细胞裂解液 (阳性对照) 盐酸赛庚啶（标准品）CYPROHEPTADINE HYDROCHLORIDE质量规格：HPLC法含量测定

原代系膜细胞培养特制添加剂Many types of cells包装：5/2.5/1ml（标准品）Amidopyrine/aminopyrine质量规格：含量测定

CDK16 Others Human 人 CDK16 / PCTAIRE1 / PCTK1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 沙利度胺（标准品）Thalidomide质量规格：含量测定
44，同人病毒4型PCR检测试剂盒供应C2C12, 小鼠肌原细胞 人细胞，DU145细胞 SK-MES-1(人细胞)白杨素(标准品）Chrysin质量规格：HPLC>98%,分析标准品

人肺巨细胞癌低转移细胞株;PG-LH7白杨素Chrysin质量规格：>98%,BR

CPM Others Human 人 CPM / Carboxypeptidase M 人细胞裂解液 (阳性对照) 刺芒柄花素（标准品）Formononetin质量规格：HPLC>98%,分析标准品

人肝星形细胞RNAHHSteC miRNA5 μg刺芒柄花素Formononetin质量规格：>98%,BR

TCN2 Others Mouse 小鼠 TCN2 / anscobalamin-II 人细胞裂解液 (阳性对照) 大豆素,黄豆苷元(标准品）Daidzein质量规格：HPLC>98%,分析标准品
细胞名称 种属1克AR，99.5%

AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人细胞裂解液 (阳性对照) [2-(基炳1酰氧)基]二基-(3-磺炳基)轻氧化铵 3-[Dimqthyl-[2-(2-mqthylprop-2-qnoyloxy)qthyl]czcniumyl]propcnq-1-sulfonctq 3637/6/1

人骨骼肌成肌细胞总RNAHSkMM NAL-Histidine(S)-2-基-3-(4-咪唑基)酸10克BR，99%

HSPA1A Others Human 人 HSP70 / HSPA1A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) Bariumchromate902钡黄100克BR，98%

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS5A¤;;Wood alcohol
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。