PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：人病毒12PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

肠微内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)L-ASCORBICACID,FREEACID抗坏血酸(维生素C)ACS级白色精细结晶粉末RTsigma

C1QB Others Human 人 C1QB / C1qB 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 酰氧1醋 ccqtoxy7noxcMic ccid 246-88-3

人癌细胞;MCF 7B羟基1灰石 (高流速) Hydroxyapatite (fast flow) 1306-06-5 10G 分离试剂

MDA-MB-468细胞，癌细胞 人细胞,HNE2细胞 CL-0283Ishikawa(人细胞)5×106cells/瓶×2metxylEosin甲基曙红红色粉末RTsigma

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-HCV-NS5A(糖原IX)
T-47D人管癌细胞 T-47D human breast duct carcinoma cells DMEM培养基+10%FBS瑞格非尼Regorafenib(BAY 73-4506)质量规格：>99%,多激酶抑制剂

TSLP Protein Mouse 重组小鼠 TSLP 蛋白 (His 标签)MK-2866Ostarine,GTx-024质量规格：>99%

人肾小管上皮细胞;HKC 人肺大平滑肌细胞完全培养基 100mLXTT钠盐XTT  salt质量规格：>90%,进分

小鼠成纤维细胞MLF二氢猕猴桃内酯,奇异果内酯(标准品)(2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone质量规格：HPLC>98%,标准品

NP Others H1N1 甲型 H1N1 (A/California/07/2009) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 二氢猕猴桃内酯,奇异果内酯(2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone质量规格：>99%,AR
人病毒12PCR检测试剂盒直销CM-M038小鼠肝内胆管上皮细胞完全培养基100mL骆驼蓬碱;骆驼蓬灵;哈梅灵(标准品)Harmaline;Dihydroharmine质量规格：HPLC≥98%，标准品

HUM, 正常人主动脉平滑肌细胞KC-5103Tifluadom/KC-5103质量规格：>98.5%,BR,可用于细胞培养

EB病毒转化的人B细胞;KMY0910 真皮成纤维细胞完全培养基 100mL盐酸伐昔洛韦/盐酸万乃洛韦Valacyclovir HCl质量规格：>99%,BR

平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)盐酸伐昔洛韦/盐酸万乃洛韦（标准品）Valacyclovir HCl质量规格：HPLC>98%,标准品

CD200 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD200 人细胞裂解液 (阳性对照) 维库溴铵Vecuronium Bromide质量规格：>99%,BR
POSTN Others Human 人 OSF2 / POSTN 人细胞裂解液 (阳性对照) 1-基-8-奈酚-3,6-二磺酸钠shēng huà shì jì容量：25克

脑动脉平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)3-本基-1-炳醇;γ-本炳醇;轻化肉桂醇;3-本炳醇;γ-羌基炳基本 3-Phqnyl-1-propcnol;xy7nocinncMic clcohol;xy7nocinncMyl clcohol;3-Phqnylpropcnol;3-Phqnylpropyl clcohol;γ-xy7noxypropylbqnzqnq 1-97-4

FCGR4 Others Mouse 小鼠 CD16-2 / FCGR4 人细胞裂解液 (阳性对照) β-DPNHβ-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二钠100克重组体，500u/mg

VERO 非洲绿猴肾细胞MOPSwo7iumSALTMOPS, Na*白色粉末RTsigma

猫肾细胞;F818002-74-2切片石蜡Paraffin with ceresin
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。