PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：人病毒1型群PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

中国仓鼠卵巢细胞;CHO，英文名或英文缩写：Gallium，级别：CP，98%，规格：25毫升

FGFR3 Others Mouse 小鼠 FGFR3 / CD333 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-基苯 2-Cyanobenzoic acid,88% 3839-22-3 1G 通用试剂

RN-c, 大鼠皮质神经元芳樟醇;里那醇;沉香醇;芫荽醇;沉香萜醇;伽罗;胡荽醇;3,7-二基-1,6-忻二1-3-醇 Linclool;3,7-DiMqthyl-1,6-octcdiqn-3-ol;2,6-DiMqthyl-2,7-octcdiqn-6-ol 78-70-6

INSL4 Others Human 人 INSL4 / EPIL 人细胞裂解液 (阳性对照) Q琼脂糖凝胶FF1克

人皮肤成纤维细胞;CCC-HSF-1139-13-9氮基三乙酸nitnilotriacetic acid
TNFRSF6B Others Human 人 DCR3 / TNFRSF6B 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 芍药内酯苷(标准品）Alibiflorin质量规格：HPLC≥96.50%，标准品

气管上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)蛇床子素（标准品）Osthole质量规格：HPLC≥98%，标准品

蚊源细胞 人腺癌细胞，SW620[SW-620]细胞 HCC 94 [HCC941122](子宫鳞癌细胞(高分化))蛇床子素Osthole质量规格：≥98%,BR

人胃腺癌细胞;BGC-823麝香酮（标准品）Muscone质量规格：GC≥98%，标准品

PVR Others Human 人 CD155 / PVR 人细胞裂解液 (阳性对照) 升麻醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷（标准品）Cimigenol-3-O-β-D-xylpyranoside质量规格：HPLC≥98%，标准品
人病毒1型群PCR检测试剂盒说明书PDCD1 Others Rat 大鼠 PD1 / PDCD1 人细胞裂解液 (阳性对照) 色素(醇溶）Nigrosin alcohol soluble质量规格：BS

人红系细胞;TF-17-羟基;伞形花内酯（标准品）7-Hydroxycoumarin质量规格：GC≥98%，标准品

杂交瘤(B类);C3110D2B2 细胞，DU145细胞 H4-ⅡE细胞，大鼠细胞6,7,8,9脱氢帕潘立酮盐酸盐6,7,8,9 Dehydro Paliperidone Hydrochloride质量规格：美国进口

WM451, 人色素瘤细胞 HumanN-氧基帕潘立酮Paliperidone N-Oxide质量规格：美国进口

HA Others H5N2 甲型 H5N2 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 帕潘立酮-d4Paliperidone-d4质量规格：美国进口
EB病毒转化的人B细胞;KMY0910拓扑替康羧酸钠盐质量规格：美国进口Topotecan Carboxylic Acid  Salt

大鼠气管上皮细胞;RTE 慢性髓原细胞，K-562细胞 P3X63Ag8.653细胞，小鼠细胞拓扑替康质量规格：美国进口Topotecan

ACHN, 人肾细胞腺癌细胞 Human15-酮基氟前列醇异丙酯质量规格：美国进口15-keto Fluprostenol isopropyl ester

CRTAM Others Human 人 CRTAM 人细胞裂解液 (阳性对照) 曲唑酮盐酸盐-d6质量规格：美国进口Trazodone-d6 Hydrochloride

上皮细胞培养基MEpiCMN-去甲基米非司酮质量规格：美国进口N-Demethyl Mifepristone
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。