PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：人病毒33PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

MET Others Human 人 c-MET / HGFR (aa 956-1390) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) EDTA四钠盐，英文名或英文缩写：EDTA tetrawo7ium salt，级别：BR，98%，规格：10克

CL-0364HuT 78(人T细胞细胞)5×106cells/瓶×2四甘醇 Bis[2-(2-xy7noxyqthoxy)qthyl] qtqr 11-60-7

HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系 人绒癌细胞VP16耐药株TNFa转染，JEG-3/VP16-TNFa细胞 7F2(小鼠杂交瘤细胞)本亚磺酸钠，英文名或英文缩写：Benzenesulfinic acid wo7ium salt，级别：高，99%，规格：500ul*100支

人细胞;A-427 [A427]二乙酰基，英文名或英文缩写：2,4-Pentanedione，级别：BR，规格：2克

CD7 Others Mouse 小鼠 CD7 人细胞裂解液 (阳性对照) PEG400 200g Sigma分装
SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-1全氟辛酸(分析标准品, 用于环境分析)Pentadecafluorooctanoic acid质量规格：分析标准品, 用于环境分析

IFNA5 Others Human 人 IFNαG / IFNaG / Ierferon alpha-G 人细胞裂解液 (阳性对照) 正辛酸(分析标准品,≥99.9%(GC))n-Octanoic acid质量规格：分析标准品,≥99.9%(GC)

豚鼠皮肤细胞;GP-S2蓖麻油酸(分析标准品,99%)Ricinoleic acid质量规格：分析标准品,99%

IFNA14 Others Mouse 小鼠 IFNA14 / Ierferon alpha-14 人细胞裂解液 (阳性对照) 硬脂酸(分析标准品,≥99.5%(GC))Stearic acid质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC)

CL-0093HCC1937(人癌细胞)5×106cells/瓶×2甜蜜素(标准品) Cyclamate质量规格：分析标准品
人病毒33PCR检测试剂盒说明书5-8F, 人高转移细胞系(6S)-四氢-L-二硫酸生物蝶呤(6S)-Tetrahydro-L-biopterin Disulfate质量规格：美国进口

白介素-2转染耐VP16绒癌细胞;JEG-3/VP16-IL-2 大鼠肠内皮细胞完全培养基 100mL(6S)-四氢-L-硫酸生物蝶呤(6R)-Tetrahydro-L-biopterin Sulfate质量规格：美国进口

组织源性原代细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)/1ml7,4'-二羟基黄酮（标准品）7,4'-DIHYDROXYFLAVONE质量规格：供含量测定用

PILRA Others Human 人 PILR-alpha / PILRA 人细胞裂解液 (阳性对照) 千金子素L1（标准品）Euphorbiasteroid质量规格：供含量测定用

小鼠;P19异型南五味子丁素（标准品）heteroclitin D质量规格：含量测定
人细胞;PC-3 [PC3]wo7iumD-pantothenate右旋泛酸钠100克CP，97.5%

PDE1C Others Human 人 PDE1C 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 二硫化钼 Molybdenum disulfide,99% 1317-33-5 100G 通用试剂

人海马神经元G,D,X-401 GDX-401

RLFs, 大鼠 R1000细胞 WISH(羊膜细胞)D-白酸，英文名或英文缩写：D-Leucine，级别：BR，99%，规格：5克

人结直肠腺癌细胞;LoVo16872-11-0四扶硼酸Fluoroboric acid
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。