PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：甲型病毒107亚型PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

腺病毒转化的人胚肾细胞;AAV-2932，5-二羟基本酸shēng huà shì jì容量：25克

HONE1细胞，人细胞 小鼠瘤细胞,EL4.IL-2细胞 CM-H030人外周血白细胞完全培养基100mL二十七烷 Heptacosane,≥98.0% 593-49-7 1G 通用试剂

NG108-15(小鼠神经细胞瘤与大鼠神经之融合细胞) 5×106cells/瓶×2格拉司琼相关物质A Grcnisqtron Rqlctqd CoMpound c;2-Mqthyl-N-[(1R,3r,5S)-9-Mqthyl-9-czcbicyclo[3.3.1]non-3-yl]-2H-indczolq-3-ccrboxcMidq 1747-4-8

Promocell C-26040 Placeal Epithelial CellGrowth Medium, 胎盘上皮细胞生长培养基(即用型) 500mlYEASTEXTRACT,BACTERIOLOGICAL酵母粉细菌学级粉末RT不sigma

成纤维细胞培养基-2(用于心肌成纤维细胞)FM-2124-17-4二乙二醇丁醋酸酯2-(2-Butoxyethoxy)etxyl acetate
P388D1(小鼠样瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 野猪 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人细胞裂解液 (阳性对照) 头孢唑啉钠（标准品）Cefazolin 质量规格：HPLC>95%,标准品

小鼠胚胎成纤维细胞(HNP抗性);HNP MEF(CF-1)哌拉西林钠Piperacillin  质量规格：>900μg//mg,USP,BR

CHODL Others Mouse 小鼠 CHODL / CHOndrolectin 人细胞裂解液 (阳性对照) 哌拉西林钠(标准品)Piperacillin  质量规格：含量测定

LNCaP 环吡司胺; 环吡酮胺Ciclopirox Olamine质量规格：>99%,USP32,BR,可用于细胞培养

Hs 578T人癌细胞 Hs human breast cancer cell line 578T DMEM+10%FBS环吡司胺; 环吡酮胺（标准品）Ciclopirox Olamine质量规格：HPLC>98%,标准品
甲型病毒107亚型PCR检测试剂盒说明书Promocell C-23061 Skeletal Muscle CellDiffereiation Medium, 骨骼肌细胞分化培养基(即用型) 500ml甘氨酸-DL-亮氨酸Glycyl-DL-leucine质量规格：进分

前脂肪细胞分化生长添加物PAdDSL-高脯氨酸L-Pipecolic acid 质量规格：>98%,BR

SELP Others Mouse 小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人细胞裂解液 (阳性对照) L-正缬氨酸L-Norvaline质量规格：99%,BR

人细胞;LNCaPL-叔亮氨酸L-tert-Leucine质量规格：0.99

HuH7-HCV细胞，人感染HCV细胞 小鼠癌高转移细胞,MA-891细胞 SV40转化的非洲绿猴肾细胞;COS-7L-茶氨酸L-Theanine质量规格：≥98%,BR
T24, 人细胞 胚癌细胞,Pcc4细胞 NCI-H1299(人细胞)十一醛shēng huà shì jì容量：25克

绿色荧光蛋白标记小鼠子细胞;U14-GFP2，6-二录醌-4-录亚安 2,6-Dichloroinoneonq-4-chloroimidq 101-38-

FGFR3 Others Mouse 小鼠 FGFR3 / CD333 人细胞裂解液 (阳性对照) 四甘醇，英文名或英文缩写：TEG，级别：AR，98.5%，规格：5克

人皮肤成纤维样细胞;HSF2葡萄球菌选择性琼脂shēng huà shì jì容量：1克

人肠平滑肌细胞(HISMC)( 5×105 )7752-82-12-基-5-溴嘧啶2-Amino-5-bromopyrimidine
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。