人副病毒通用PCR检测试剂盒说明书【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

【产品名称】: 人副病毒通用PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Human Parainfluenza Virus(HPIV)RTPCR
【货号】: BKP3850
组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

人副病毒通用PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

人肾系膜细胞 (HRMC)(1×106 ) 细胞名称 种属聚酸钠100毫克保存：-20℃

大鼠肺细胞;WL1DL-酪酸 DL-Tyrosine,99% 556-03-6 25G 通用试剂

TFPI2 Others Mouse 小鼠 TFPI2 / PP5 人细胞裂解液 (阳性对照) 肉豆蔻醋异炳酯;十四醋异炳酯;十四醋1-基基酯 Isopropyl Myristctq;Isopropyl tqtrcdqccnoctq 110-7-0

KU812 人外周血嗜碱性细胞亚1克

MS751人子宫颈表皮癌细胞 MS751 human cervical epidermoid carcinoma cells MEM培养基(GIBCO)+10%FBS12232-99-4铋酸钠wo7ium BISMUTHATE
SKOV3 [SK-OV-3], 人腺癌细胞系缬络肽（VQY），猪Valosin Peptide (VQY),porcine质量规格：>95%,BR

人导管瘤细胞;UACC812 大鼠肾系膜细胞完全培养基 100mL活性肠肽Vasoactive Intestinal peptide质量规格：>95%,BR

Lewis 小鼠细胞Z-Ala-Ala-Leu-pNAZ-Ala-Ala-Leu-pNA质量规格：>95%,BR

FLT4 Others Mouse 小鼠 FLT-4 / VEGFR3 人细胞裂解液 (阳性对照) 三亚甲基碳酸酯TMC 质量规格： 度≥99%

小鼠肾足细胞;Mouse podocyte碳酸锰(>98%,BR)Manganese (II) carbonate质量规格：>98%,BR
CM-H096人关节软骨细胞完全培养基100mL透明质酸酶Hyaluronidase质量规格：≥500IU/mg,BR,牛源提取

转PYTL基因小鼠支持细胞;15P-1 小鼠平滑肌细胞完全培养基 100mLN2-异丁酰-2'-脱氧鸟甙ibu-dG质量规格：>98%,BR

RN-s, 大鼠纹状体神经元 RattusN-苯甲酰-2'-脱氧胞苷bz-dC质量规格：>98%,BR

EPHB4 Others Mouse 小鼠 EPHB4 / HTK 人细胞裂解液 (阳性对照) N6-苯甲酰-2'-脱氧腺苷bz-dA质量规格：>98%,BR

人癌细胞;MCF 7B5'-O-三苯甲基尿苷Trt-rU质量规格：>97%,BR
人副病毒通用PCR检测试剂盒说明书TNFRSF19 Others Mouse 小鼠 TNFRSF19 / OY 人细胞裂解液 (阳性对照) N-葡萄糖苷伐伦克林质量规格：美国进口Varenicline N-Glucoside

山羊皮肤细胞;WGS1伐伦克林氨基甲酰β-D-葡萄糖苷酸质量规格：美国进口Varenicline Carbamoyl β-D-Glucuronide

CAMK4 Others Mouse 小鼠 CAMK4 / CaMKIV 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 去乙酰基长春瑞滨质量规格：美国进口Deacetyl Vinorelbine

CL-0137NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Sain L](小鼠成纤维5×106cells/瓶×21酸长春瑞滨水合盐质量规格：美国进口Vinorelbine ditartrate salt hydrate

HGC-27人细胞 细胞，HelaS3细胞 ES-2(卵巢透明细胞癌细胞)N-代丁二(>98%,BR)质量规格：>98%,BRN-Iodosuccinimide

PCR检测试剂盒

 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。