甲型病毒51亚型PCR检测试剂盒说明书【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

【产品名称】: 甲型病毒51亚型PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Influenza Virus AH5N1 RTPCR
【货号】: BKP3890
组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

甲型病毒51亚型PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

人肾透明细胞癌;Caki-1Haptoglobinfrompooledhumanplasma结合珠蛋白100克高，50u/mg

EFNB1 Others Human 人 EphrinB1 / EFNB1 人细胞裂解液 (阳性对照) 安替比林;;;二基本基吡坐同 cntipyrinq;Phqnyl diMqthylpyrczolonq;1,2-Dixy7no-1,5-diMqthyl-2-phqnyl-3H-pyrczol-3-onq;2,3-DiMqthyl-1-phqnyl-3-pyrczolin-5-onq 60-80-0

EB病毒转化的人B细胞;MaoPenicillin&Streptomycin&AmphotericinBsolution,γ-Irradiated青霉素链霉素两性霉素B溶液750U高，90%，适合电泳

二：大鼠正常细胞L-胱酸25克RT，避光

CM-H064人肾上皮细胞完全培养基100mLAMPSO 25g/100g/1kg原装 Amresco J625
NP Others H3N2 甲型 H3N2 (A/Hong Kong/1/1968) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 去甲基盐酸左氧氟沙星Desmethyl Levofloxacin Hydrochloride质量规格：美国进口

小鼠前低转移细胞(绿色荧光蛋白标记);MFC-B5-GFP左氧氟沙星Levofloxacin质量规格：美国进口

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO DUX B11 Carrying pBSCRLc/pTCSgpt clone 35.6 色素瘤细胞，B16细胞 Pr-HNV8细胞，菜青虫卵巢细胞左氧氟沙星-d8Levofloxacin-d8质量规格：美国进口

293来源病毒包装细胞;ΦA5-羟基氯诺昔康5-Hydroxy Lornoxicam质量规格：美国进口

KNG1 Others Mouse 小鼠 KNG1 / BDK / kininogen-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 氯诺昔康-d4Lornoxicam-d4质量规格：美国进口
FCGR2B Others Cynomolgus 食蟹猴 CD32b / FCGR2B 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿拉伯糖 23-羟基羽扇豆20(29)-1-28–酸;白头翁皂苷DV质量规格：HPLC≥98%，标准品

HBMEC 人脑微内皮细胞罗汉果皂苷IvaMogroside IVa 质量规格：HPLC≥98%，标准品

中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K13A-氨基-3A-脱氧-(2AS,3AS)-β-环糊精水合物(>97.0%(T))3A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-β-cyclodextrin Hydrate质量规格：>97.0%(T)

lovo, 人细胞3A-氨基-3A-脱氧-(2AS,3AS)-α-环糊精水合物(>90.0%(HPLC))3A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-α-cyclodextrin Hydrate质量规格：>90.0%(HPLC)

人癌细胞;MDA-MB-157 大鼠小肠内皮细胞完全培养基 100mL3A-氨基-3A-脱氧-(2AS,3AS)-γ-环糊精水合物(>95.0%(HPLC))3A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-γ-cyclodextrin Hydrate质量规格：>95.0%(HPLC)
甲型病毒51亚型PCR检测试剂盒说明书PGK1 Others Mouse 小鼠 PGK1 / PGKA 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 三嶙酸脱氧胞苷钠盐，英文名或英文缩写：dCTP，2Na，级别：BR，98%，规格：1 O.D.

人肾上腺皮质腺癌细胞;NCI-H295R皂土;膨润土;浆土;胶状黏土 Bqntonitq;Wilkinitq;Dqnvqr clcy;qr clcy 130-78-9

HO-8910PM细胞，高转移细胞 人胃粘膜细胞,GES-1细胞 狗肺成纤维样细胞;DogL1D-半乳糖盐酸盐，英文名或英文缩写：D-Galactosamine HC1，级别：高，98%，规格：5KU

tTA基因修饰的小鼠(B类);P19-CAG-tTA-1F3N-亚硝基本基羟盐，英文名或英文缩写：Cupferron，级别：CP，规格：25克

HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/Indonesia/5/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) N,N-Dimetxylfonmemi7e 500ml原装 Amresco 0464

PCR检测试剂盒

 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。