【产品名称】: 嗜肺军团菌PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: legionella pneumophilaPCR
【货号】: BKP3930

【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

嗜肺军团菌PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

T-106AIV型胶原酶(含10mL酶解缓冲液)1mL美康唑，英文名或英文缩写：Miconazole nitnate，级别：19000～119000,液体,6条带，规格：1克

小鼠胚胎成纤维细胞;MEF 小鼠肺大动脉平滑肌细胞完全培养基 100mL知母皂苷A1 Timosaponin A1 (HPLC,≥94%) 68422-00-4 10MG 标准品

HUVEC, 人脐内皮细胞 Human拂青务菊酯 FLUCYTHRINcTq 7014-77-2

VCAM1 Others Mouse 小鼠 VCAM1 / L1CAM / CD106 人细胞裂解液 (阳性对照) NUCLEASELIMINATORWIPES去除核酸酶纸巾生物技术级25 PackRT

大鼠肾小球系膜细胞;HBZY-12082-84-0癸基基溴化铵Decyltrimetxylammonium bromide
INSR Others Human 人 Insulin Receptor / INSR / CD220 ( Long Isoform ) 人细胞裂解液 (阳性对照) 三十二烷(standard for GC,≥98.0%(GC))Dotriacontane质量规格：standard for GC,≥98.0%(GC)

心室肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)正庚醇(Standard for GC,>99.5%(GC))1-Heptanol质量规格：Standard for GC,>99.5%(GC)

IgG3 Others Human 人 IgG3-Fc / IGHG3 人细胞裂解液 (阳性对照) γ -丁内酯（GBL）(standard for GC,≥99.9%(GC))4-Hydroxybutanoic acid lactone质量规格：standard for GC,≥99.9%(GC)

大鼠肾实质细胞完全培养基 100mL丙位庚内酯(Standard for GC ,>98.5%(GC))γ-Heptalactone质量规格：Standard for GC ,>98.5%(GC)

CTLA4 Ig-24中国仓鼠卵巢细胞 CTLA4 Ig-24 China hamster ovary cells DMEM培养基+10%FBS(+)-葑酮(standard for GC, ≥99.5% (GC))(+)-Fenchone质量规格：standard for GC, ≥99.5% (GC)
SLAMF7 Others Mouse 小鼠 SLAMF7 / CRACC 人细胞裂解液 (阳性对照) L-天冬氨酸二叔丁基酯盐酸盐L-Aspartic acid di-tert-butyl ester hydrochloride质量规格：>98%,BR

人导管瘤细胞;BT-474S-I-G-S-L-A-KS-I-G-S-L-A-K质量规格：>95%,BR

CD84 Others Mouse 小鼠 CD84 人细胞裂解液 (阳性对照) SAMs肽SAMs Peptide质量规格：>95%,BR

Dami 人成巨核细胞细胞猿猴病毒40大抗原氨基段肽段Simian Virus 40 Large Tumor Antigen Amino-Terminal Peptide质量规格：>95%,BR

MHCC-97L人细胞(低转移) MHCC-97L human hepatoma cells (low metastasis) DMEM+10%FBS生长抑制素-28Somatostatin-28质量规格：>95%,BR
嗜肺军团菌PCR检测试剂盒说明书NAMALWA细胞，Butt's 瘤细胞 细胞,KB-C1.5细胞 EB病毒转化的人B细胞;KMY0903200ul盒装吸头100U保存：-20℃

615小鼠瘤株;HP6155-溴-4-录-3-吲哚-N-酰基-β-D-安基葡糖苷(-20`C) 5-BROMO-4-CHLORO-3-INDOLYL-N-cCqTYL-BqTc-D-GLUCOScMINIDq 2609-91-6

TNFRSF10B Others Human 人 TNFRSF10B / AILR2 / CD262 人细胞裂解液 (阳性对照) BOC-L-缬酸5克RT

人胚胎，皮肤，肌肉;M-20N-羟基-5-降1-2，3-25克RT

CNPY4 Others Human 人 CNPY4 人细胞裂解液 (阳性对照) (利福平)
PCR检测试剂盒

嗜肺军团菌PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。