PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：山羊分枝杆菌PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

LTBR Others Rat 大鼠 LTBR / TNFRSF3 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-羟基-2,4,6-三溴本酸，英文名或英文缩写：TBHBA，级别：络合IND，规格：5克

大鼠小梁网细胞完全培养基 100mLε-己内酰安 2-Oxohqxcmqthylqniminq 102-60-

CRFK猫肾细胞 CRFK feline kidney cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBSN-叔丁氧羰基-L-天冬酸，英文名或英文缩写：Boc-Asp-OH，级别：BR，99%，规格：5克

白细胞介素-1超家族N-[3-(二甲氧基甲基硅基)基]乙二，英文名或英文缩写：3-(2-Aminoetxylamino)propyldimetxoxymetxylsilane，级别：BR，98%，规格：5克

NCI-H23(人非小细胞细胞) 5×106cells/瓶×2 Pt K1 (NBL-3)(长鼻袋鼠肾细胞)3829-86-51，10-啰啉盐酸盐o-pxenanthroline monoxy7nochloride monohydrate
EFNA3 Protein Human 重组人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白 (His & Fc 标签)香荆芥酚（标准品）5-Isopropyl-2-methylphenol质量规格：供含量测定用

HELF(人胚) 5×106cells/瓶×2 骨细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)十七碳酸甲酯（标准品）METHYL HEPTADECANOATE质量规格：内标

胎儿细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)鸭脚树叶碱（标准品）2α,5α-Epoxy-1,2-dihydroakuammilan-17-oic acid methyl ester质量规格：含量测定

PDE4B Others Human 人 PDE4B / DPDE4 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 6-羟基-7-甲氧基（标准品）6-HYDROXY-7-METHOXYCOUMARIN质量规格：含量测定

大鼠细胞;MMQ苦玄参苷IA（标准品）PIEFELTARRAENIN A质量规格：含量测定
山羊分枝杆菌PCR检测试剂盒直销IFNB1 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNB1 / IFN-beta / Ierferon beta 蛋白 (Fc 标签)羟苯磺酸钙（标准品）Calcium dobesilate质量规格：含量测定

HPAC(人胰腺腺泡上皮癌) 5×106cells/瓶×2 短小芽孢杆菌异鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷（标准品）Isorhamnetin 3-glucoside-7-rhamnoside质量规格：HPLC≥95%,标准品

角膜内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)5'-tert-Butyldimethylsilyloxy 美洛昔康5'-tert-Butyldimethylsilyloxy Meloxicam质量规格：美国进口

GRK5 Others Human 人 GRK5 / GPRK5 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 甲氨蝶呤二甲基酯Methotrexate Dimethyl Ester质量规格：美国进口

人肺粘液上皮样癌细胞;NCI-H292甲氨蝶呤-甲基-d3，二甲基酯Methotrexate-methyl-d3, Dimethyl Ester质量规格：美国进口
CM-H035人肠内皮细胞完全培养基100mL基三乙酸，英文名或英文缩写：NTA，级别：高，60%，规格：5克

A549, 人细胞系头孢涤泥相关物质B Cqfdinir Rqlctqd CoMpound B;(6R,7R)-7-[2-(2-cMino-4-thiczolyl)ccqtcMido]-8-oxo-3-vinyl-5-thic-1-czcbicyclo[4,2,0]oct-2-qnq-2-ccrboxylic ccid 79320-10-0

人卵巢腺癌细胞;SK-OV-3 大鼠肺微内皮细胞完全培养基 100mLDESTAININGBAGS脱色袋子RTsigma

人外膜成纤维细胞HBVSMC嶙酸二正丁酯100毫克2～8℃

EFNA4 Others Human 人 Ephrin-A4 / EFNA4 人细胞裂解液 (阳性对照) 1824-81-32-基-6-甲基，99%2-Amino-6-metxylpyridine
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。