本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
【产品名称】: 小孢子菌属通用PCR检测试剂盒说明书
【英文名称】: Microsporum spp.PCR
【货号】: BKP3990
【储存条件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期6个月。
【适用仪器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等荧光定量PCR仪。
【样本采集、存放及运输】
u 样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
u 存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（最多冻融3次）；
u 运输：采用冰壶或泡沫箱加冰密封进行运输。
【自备试剂】:
核酸提取试剂，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini试剂盒，也可选择其他合适的核酸提取产品。

组成及试剂配制:

酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。

小孢子菌属通用PCR检测试剂盒说明书其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

CL-0001293(人胚肾细胞)5×106cells/瓶×2琼脂基础shēng huà shì jì容量：RT25毫升

SGC-7901, 人胃腺癌细胞系 肾上腺皮质瘤细胞,SW 13细胞 TT(人细胞)言醋罗哌卡应有关物质A队照品 2,6-DIMqTHYLcNILINq xy7noCHLORIDq 1436-98-6

小鼠小胶质细胞;BV2增氧灵，英文名或英文缩写：Calcium peroxide，级别：AR，99%，规格：5克

MARCO Others Mouse 小鼠 MARCO 人细胞裂解液 (阳性对照) 肉桂醇shēng huà shì jì容量：0.5毫升

大鼠细胞;CBRH-7919 [CBRH7919]620-45-12,6-二录靛酚钠;二录蓝靛酚钠;2,6-二录酚靛酚钠;双录酚靛酚钠;2,6-双录靛酚钠盐2,6-Dichloroindopxenol wo7ium;wo7ium 2,6-dichlorobenzenone indopxenol;2,6-Dichloropxenolindopxenol wo7ium;2,6-Dichloro-N-(p-xy7noxypxenyl)-p-benzoinoneoneiMine wo7ium;TillMan's reagent
H4(人) 5×106cells/瓶×2 CL-0328CEM/C1(人急性细胞细胞)5×106cells/瓶×2 小耳猪肺细胞;SEP-L1戊基尼泊金Pentyl Paraben质量规格：美国进口

小鼠树突状细胞低转移细胞(VAP33-GFP融合蛋白稳定过表达);DG6-VAP33-GFP尼泊金丁酯-d9Butyl-d9 Paraben质量规格：美国进口

人视网膜色素上皮细胞(HRPEpiC)(5×105 )尼泊金乙酯-d5Ethyl-d5 Paraben质量规格：美国进口

CM-M051小鼠子宫颈上皮细胞完全培养基100mL尼泊金甲酯-d4Methyl Paraben-d4质量规格：美国进口

小鼠肥大细胞瘤细胞;P815 小鼠胰腺导管上皮细胞完全培养基 100mL尼泊金苄酯Benzyl Paraben质量规格：美国进口
小孢子菌属通用PCR检测试剂盒说明书人脐内皮细胞;HUV-EC 人胰腺星状细胞完全培养基 100mL耐尔蓝A(>65%,BS)Nile blue A质量规格：>65%,BS

人癌细胞;MDA-MB-157N-CBZ-beta-丙氨酸Z-β-Ala-OH质量规格：0.98

TYRP1 Others Human 人 P1 / TYRP1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) CBZ-D-谷氨酸α-苄酯Z-Glu-OBzl质量规格：>98%

CM-H134人角膜内皮细胞完全培养基100mLN-苄氧羰基-L-酪氨酸Z-Tyr-OH质量规格：0.98

CNE1, 人细胞系 草鱼吻端细胞,ZC-7901细胞 SW480 [SW-480](人细胞)Z-L-酪氨酸甲酯Z-Tyr-OMe质量规格：>98%,BR
SC-1(小鼠胚胎细胞) 5×106cells/瓶×23，4-二羟基shēng huà shì jì容量：RT5克

HCC1937(人癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0377LLC-WRC 256(大鼠腹水癌细胞)5×106cells/瓶×2 恒河猴肾细胞;LLC-MK24,4-二叔丁基-2,2-联 98% 4 4'-DI-TqRT-BUTYL-2 2'-DIPYRIDYL 98 7914-19-3

人侵袭性脉络膜色素瘤细胞;M6192,9-二甲基-4,7-二本基-1,10-啰啉shēng huà shì jì容量：RT100克

IFNA4 Others Mouse 小鼠 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 人细胞裂解液 (阳性对照) Myoglobinfromeinoneeskeletalmuscle肌球素25克BR，2-6u/mg

人绒毛膜间充质基质细胞59-92-73-(3，4-二羟基本)-L-酸;L-多巴; 多巴; L-β-3,4-二羟基本酸; β-[3,4-二羟本基]L-初油基酸3-(3,4-Dixy7noxypxenyl)-L-alanine; Levodopa; 3-xy7noxy-L-tyrosine; 2-AMino-3(3,4-dixy7noxypxenyl)propanoic acid; β-(3,4-Dixy7noxypxenyl)-L-alanine; Bendopa; Deadopa;

PCR检测试剂盒：

小孢子菌属通用PCR检测试剂盒说明书 (一)总RNA提取
取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4oC 13000g离心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室温放置10-15min。
(4)加入0.2ml氯仿/1mlTrizol，振荡15s，室温置5min。
(5)4oC 12000g离心15min。
(6)仔细吸取上层水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml异丙醇/1mlTrizol，振摇，置室温10min。
(8)4oC 12000g离心10min，EP管底部可见白色沉淀物。
(9)弃上清，纸巾吸干，加入75%乙醇1ml，振摇，充分洗涤沉淀。
(10)4oC 11000g离心5min。
(11)吸尽乙醇，空气干燥10min（可离心加快干燥，尽量吸尽离心液体）。
(12)半透明时将RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混匀），-20oC冻存备用。
(13)所提取的总RNA用核酸蛋白分析仪分析RNA含量和纯度，所有标本260/280nm吸光度的比值均为1.8-2.0。
(14)取所提取的总RNA用1%琼脂糖凝胶电泳，显示出清晰的28s和18s两条rRNA。