PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：莫佩亚病毒PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

SK-NEP-1(人肾母细胞瘤细胞) 5×106cells/瓶×2糖化酶10克RT

Hela(人细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0426RKO-E6(人转基因细胞)5×106cells/瓶×2 人胚;MRC-5双酚芴 9,9-Bis(4-xy7noxyphqnyl)fluorqnq 336-71-3

TNFa转染耐VP16绒癌细胞;JEG-3-VP16-TNFaMEGA-9MEGA-9超级5G85261-19-4RT

CD79B Others Mouse 小鼠 CD79B / B29 人细胞裂解液 (阳性对照) 100bpDNALadderⅡ100克

MKN-45 低分化(-N，N-双(2-乙磺酸))
FCGR1 Others Rat 大鼠 CD64 / FCGR1A 人细胞裂解液 (阳性对照) 司班80;司盘80Span* 80质量规格：BR

NIH?3T3? 小鼠成纤维细胞聚乙二醇1000PEG 1000质量规格：分子量1000

非洲绿猴肾细胞;BS-C-1胰蛋白胨(BD)Tryptone质量规格：BD 211705

Hela, 人细胞系丹磺酰氯DNSCl, Dansyl chloride质量规格：>98%

人小细胞细胞;NCI-H209 大鼠肺大内皮细胞完全培养基 100mLN-乙基顺丁1二N-Ethylmaleimide质量规格：>98%,BR
莫佩亚病毒PCR检测试剂盒直销IB2 Others Human 人 IB2 / B2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 西洛多辛(标准品)Silodosin质量规格：>98.5%，标准品

小鼠成肌细胞;C2C121酸溴莫尼定Brimonidine tartrate 质量规格：>99%,BR

Lec1细胞，卵巢细胞 人细胞,FL62891细胞 CL-0152MDA-MB-453(人癌细胞)5×106cells/瓶×2Bacto酵母浸粉(BD原装)Yeast extract质量规格：Bacto;BD212750

中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1无水碳酸钠 carbonate anhydrous质量规格：AR,≥99.8%

POSTN Others Human 人 OSF2 / POSTN 人细胞裂解液 (阳性对照) D-果糖D-Fructose质量规格：>99%,BR
Calu-6(人肺退行性癌细胞) 5×106cells/瓶×2 人微内皮细胞HPrMEC邻磺酰酞钠盐，英文名或英文缩写：Cresol Red wo7ium salt，级别：生物技术级，98%，规格：250毫克

人脑微内皮细胞cDNAHBMEC cDNAS-Alpine-硼完 B-ISOPINOCcMPHqYL-9-BORcBICYCLO[3.3.1]NONcNq 4371-63-1

IL23 Others Human 人 IL-23A & IL-12B Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) OED60K型发酵工业通用消泡剂，英文名或英文缩写：Antifoam OED60K，级别：超，98%，规格：1克

B95-8 绒猴EBV转化的白细胞3,4-乙撑二氧，英文名或英文缩写：EDOT，级别：2N，99%，规格：10克

CL-0190RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞细胞)5×106cells/瓶×2OPD 5g/10g/50g/250g原装 Amresco 0688
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。