PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：副病毒5型PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

2,2-Bis(hydroxymethyl)butyric acid  10097-02-6  中文名：2,2-二羟甲基丁酸  分子式：C6H12O4  度：98.0%      小鼠神经生长因子(mouse NGF)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  

2,2-Bis(4-chloroformyloxyphenyl)propane  2024-88-6  中文名：2,2-双(4-氯甲酰氧苯基)丙烷  分子式：C17H14Cl2O4  度：98.0%      小鼠核因子κB抑制蛋白α（IKB-α）ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

2,2-Bis(3-amino-4-hydroxyphenyl)hexafluoropropane  83558-87-6  中文名：2,2-双(3-氨基-4-羟苯基)六氟丙烷  分子式：C15H12F6N2O2  度：98.0%      小鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)ELISA试剂盒   48T/96T   试剂盒   组装/原装

2,2'-Bicinchoninic acid  1245-13-2  中文名：2,2'-二辛可宁酸  分子式：C20H12N2O4  度：98.0%      小鼠核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装

2,2'-Anhydro-5-methyluridine  22423-26-3  中文名：2,2'-O-脱水-5-甲基尿嘧啶核苷  分子式：C10H12N2O5  度：98.0%  关键词：    小鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装
rabbitfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit兔子促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒规格：96T/48T  2-Amino-4-chlorobenzothiazole  中文名：2-氨基-4-氯苯并噻唑  分子式：C7H5ClN2S 

rabbitfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit 兔子促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装  20-Hydroxyecdysone  中文名：20-羟基蜕皮甾酮  分子式：C27H44O7  度：98.0%

rabbitFibrinogenDegradationProduct,FDPELISAKit兔子血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISA试剂盒规格：96T/48T  2-Amino-3-chloro-1,4-naphthoquinone  2797-51-5  中文名：2-氨基-3-氯-1,4-萘醌  分子式：C10H6ClNO2 

rabbitFibrinogenDegradationProduct,FDPELISAKit 兔子血纤蛋白原降解产物(FDP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装  2,4-Dihydroxy-3-nitropyridine  中文名：  分子式：C5H4N2O4  度：98.0%

RabbitFibrinogen,FbgELISAKit兔血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒规格：96T/48T  2-Amino-3-Formylchromone  中文名：2-氨基-3-甲酰基色原酮  分子式：C10H7NO3
副病毒5型PCR检测试剂盒供应非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4B 人细胞，SK-HEP-1细胞 95-D(高转移细胞)醋酸戈舍瑞林 质量规格：BR,>98%Goserelin Acetate

人细胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]醋酸亮丙瑞林 质量规格：BR,>98%Leuprolide Acetate

TDGF1 Others Human 人 TDGF1 / CRGF 人细胞裂解液 (阳性对照) 醋酸地塞米质量规格：>98%,BP,BR,可用于细胞培养Dexamethasone Acetate

CM-H030人外周血白细胞完全培养基100mL醋酸地塞米（标准品）质量规格：HPLC>98%,标准品Dexamethasone Acetate

MAPK12 Others Human 人 ERK3 / MAPK12 / P38-gamma 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 甲氧苄啶质量规格：>99.5%,超,BP2010,BR,可用于细胞培养Trimethoprim
H22 小鼠细胞2-氯蒽(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)2-Chloroanthracene

DSC2 Others Human 人 DSC2 / Desmocollin-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 9,10-二氯蒽(>96.0%(GC))质量规格：>96.0%(GC)9,10-Dichloroanthracene

人正常肝细胞;L-021,5-二溴蒽(>97.0%(GC))质量规格：>97.0%(GC)1,5-Dibromoanthracene

HA Others H5N2 甲型 H5N2 (A/osich/South Africa/AI1091/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) 1,8-二蒽(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)1,8-Diiodoanthracene

NCI-H292 人细胞(结转移)9-酮基利培酮质量规格：美国进口9-Keto Risperidone
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。