PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：卵形PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

2-Benzothiazolyl diethyldithiocarbamate  95-30-7  中文名：二乙基二硫代氨基甲酸 2-苯并噻唑酯  分子式：C12H14N2S3    I 型胶原 N 末端肽 (X)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

p-Anisoin  119-52-8  中文名：对茴香偶姻  分子式：C16H16O4     (NO)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  

Benzoin  119-53-9  中文名：安息香  分子式：C14H12O2    神经生长因子   英文名称：    nerve growth factor    规格：   48T/96T   英文缩写：   NGF

3-Benzalphthalide  575-61-1  中文名：3-亚苄基苯酞  分子式：C15H10O2    神经生长因子受体   英文名称：    nerve growth factor  receptor   规格：   48T/96T   英文缩写：   NGFR

L-Aspartic acid  56-84-8  中文名：L-天门冬氨酸  分子式：C4H7NO4    中性粒细胞明胶酶相关性载脂蛋白   英文名称：   Neuophil gelatinase-associated lipocalin   规格：   48T/96T   英文缩写：   NGAL
封闭用正常山羊血清工作液  Ribavirin  36791-04-5  中文名：利巴韦林  分子式：C8H12N4O5  度：98.0%  关键词： 

吩嗪甲酯   1g  Trenbolone acetate  10161-34-9  中文名：  分子式：C20H24O3  度：98.0%  关键词： 

分泌型白细胞蛋白酶抑制物 (SLPI)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Anthraglycoside B  23313-21-5  中文名：大黄素-8-O-葡萄糖苷  分子式：C21H20O10 

肺表面活性物质相关蛋白A   英文名称：   Pulmonary surfacta associated protein type A   规格：   48T/96T   英文缩写：   SP-A  4-Allyloxy-2-hydroxybenzophenone  中文名：4-丙烯氧基-2-羟基二苯甲酮  分子式：C16H14O3  度：99.0%

肺表面活性物质相关蛋白 A(SP-A)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Atrazine  1912-24-9  中文名：阿特拉津  分子式：C8H14ClN5
卵形PCR检测试剂盒供应WI-38AV13细胞，人SV-40转化 大鼠胸主动脉平滑肌细胞，VSMC细胞 CL-0010786-O(人肾透明细胞癌细胞)5×106cells/瓶×2硫普罗宁（标准品）质量规格：含量测定Tiopronin

SP2/0(小鼠细胞) 5×106cells/瓶×2多索茶碱质量规格：>99%,BRDoxofylline

HDBEC-c 人类皮肤血内皮细胞(HDBEC)来自少年者 500,000cells 肝动脉内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)多索茶碱（标准品）质量规格：含量测定Doxofylline

心肌成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)PRT062607 (P505-15, BIIB057) HCl 质量规格：>98%,Syk PRT062607 (P505-15, BIIB057) HCl

CD86 Others Rat 大鼠 CD86 / B7-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 硫代烟酰胺腺嘌呤二核苷酸1酸钠盐质量规格：美国进口Thionicotinamide adenine dinucleotidephosphate  salt
TNFRSF1B Others Mouse 小鼠 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 人细胞裂解液 (阳性对照) N-二乙基亚硝，英文名或英文缩写：N-nitnosodietxylamine，级别：BR，98%，规格：5克

人肝脏间充质干细胞HMSC-hp2-羰基钠盐  2-oxobutyrate 2013-26-5 1G 通用试剂

TLK1 Others Human 人 TLK1 / PKU-beta 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) L(+)树胶全糖(啊拉伯糖) L-cRcBINOSq 238-37-0

VERO细胞衍生株;SVP偶氮脒类引发剂V50shēng huà shì jì容量：2～8℃1克

CGM1细胞，EB病毒转化的B细胞 人结直肠腺癌细胞,LS174T细胞 CM-R029大鼠肠平滑肌细胞完全培养基100mL1,8-桉树脑Cineole
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。