PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：病毒通用型PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

2-Cyclopropyl-3-[(diphenylphosphinyl)methyl]-4-(4-fluorophenyl)quinoline  中文名：  分子式：C31H25FNOP    λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒   Fast exaction kit for phage genomic DNA

2-Cyano-N-[4-(Trifluoromethyl)Phenyl]Acetamide  中文名：  分子式：C10H7F3N2O    超土壤基因组DNA快速提取试剂盒   Rapid exaction kit for genomic DNA in soil              

2-C-Methyl-D-erythrono-1,4-lactone  中文名：  分子式：C5H8O4    血红素氧化酶 (HO-1)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

2-C-Methyl-D-erythritol  中文名：2-C-甲基-D-赤藓糖醇  分子式：C5H12O4    热休克蛋白 27(HSP27)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

2-Chloromethyl-3-methyl-4-(2,2,2-trifluoroethoxy)pyridine   中文名：  分子式：C9H10Cl2F3NO    热休克蛋白 70(HSP70)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装
海藻糖含量测试盒   可见分光光度法   50管/48样              Pemetrexed di  357166-30-4  中文名：培美曲塞二钠  分子式：C21H23N5Na2O6 

还原型谷胱甘肽（GSH）测定试剂盒（微板法）                    3a-Hydroxy-3,3a,7,7a-tetrahydrobenzofuran-2,6-dione  中文名：  分子式：C8H8O4 

还原糖含量测试盒   可见分光光度法   50管/24样  3-Aminoadamantan-1-ol  中文名：  分子式：C10H17NO  度：98.0%

过氧化物酶体增殖物活化受体γ   英文名称：   Human Peroxisome Proliferators Activated Receptor γ   规格：   48T/96T   英文缩写：   PPARγ  4,5-Dimethoxy-1-cyanobenzocyclobutane  35202-54-1  中文名：  分子式：C11H11NO2 

(OC43/HKU1)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)   48T                 Annonacin  中文名：  分子式：C35H64O7
病毒通用型PCR检测试剂盒说明书U-2 OS, 人细胞羟基伊曲康唑-d8质量规格：美国进口Hydroxy Itraconazole-d8

人细胞;HOS 大鼠成纤维细胞完全培养基 100mL丁基伊曲康唑质量规格：美国进口Butyl Itraconazole

原代骨骼肌细胞培养特制添加剂Many types of cells包装：5/2.5/1ml丙基伊曲康唑质量规格：美国进口Propyl Itraconazole

EPHA3 Others Rat 大鼠 EphA3 人细胞裂解液 (阳性对照) 异丙基伊曲康唑质量规格：美国进口Isopropyl Itraconazole

叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21喷托维林质量规格：美国进口Carbetapentane
人间充质干细胞-脂肪RNAHMSC-ad miRNA5 μg2′-脱氧胸苷25克

大鼠小神经胶质细胞(RM)(5×105)-2.5-二羧醋97% 2,5-Thiophqnqdiccrboxylic ccid 48-31-9

非洲绿猴肾细胞;CV-1正嶙酸铁二水物25克

KM小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株;G422 小鼠膀胱成纤维细胞完全培养基 100mL偏硼酸钠shēng huà shì jì容量：500克

细胞名称 种属60-23-1半胱胺;巯;2-;硫代;2-基乙CysteaMine;Decarboxycysteine;2-AMinoethanethiol;2-AMinoetxylMercaptan;β-MercaptoetxylaMine;ThioethanolaMine;MercaMine; MEA
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。