PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：皱褶青霉PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

2-Amino-2'-chloro-5-nitro benzophenone  中文名：2-氨基-5-硝基-2'-氯二苯甲酮  分子式：C13H9ClN2O3    内皮生长因子D   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor D   规格：   48T/96T   英文缩写：   VEGF-D

2-Amino-2',5-dichlorobenzophenone  中文名：2-氨基-2',5-二氯二苯酮  分子式：C13H9Cl2NO    内皮生长因子165   英文名称：   vascuiar endothelial growth factor 165   规格：   48T/96T   英文缩写：   VEGF165

2-Allylphenol  中文名：2-烯丙基酚  分子式：C9H10O    内皮生长因子 D(VEGF-D)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

2-Acetylfluorene  中文名：2-乙酰芴  分子式：C15H12O    内皮生长因子 165(VEGF165)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装

2-Acetylbutyrolactone  中文名：2-乙酰基丁内酯  分子式：C6H8O3    内皮生长因子受体 1(VEGF-R1)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装
超氧化物歧化酶（SOD）分型测试盒（羟胺法）  Polyhydroxybutyrate  中文名：聚羟基丁酸酯  分子式：C12H20O7 

超氧化物歧化酶   30KU  Amoxicillin  中文名：阿莫西林  分子式：C16H19N3O5S  度：98.0%

超微量Na+K+–ATP酶测定试剂盒  Precursor of cefcapene diisopropylanmine salt  153012-37-4  中文名：  分子式：C28H42N6O8S2  度：98.0%  关键词： 

超微量Na+K+–ATP酶测定试剂盒                    Pitavastatin calcium  147526-32-7  中文名：匹伐他汀钙  分子式：C50H46CaF2N2O8 

超微量Ca-ATP酶测定试剂盒  Aurantio-obtusin  中文名：橙黄决明素  分子式：C17H14O7  度：99.0%
皱褶青霉PCR检测试剂盒说明书大鼠肝星形细胞RHSteC来曲唑（标准品）质量规格：HPLC>98%,标准品Letrozole

NCI-H596[H596]细胞，人细胞 人细胞,SK-RC-42细胞 人肝星形细胞HHSteC醋酸亮丙瑞林质量规格：>97%.BRLeuprorelin Acetate （Leuprolide Acetate）

小香猪皮肤细胞;SSC-S2氟米龙醋酸酯质量规格：>97%Fluorometholone Acetate

NCR3 Others Human 人 NKp30 人细胞裂解液 (阳性对照) 十溴二苯质量规格：>98%Pentabromophenyl ether

CM-R068大鼠肾小管平滑肌细胞完全培养基100mL氨基杂环盐酸盐质量规格：>98%3-Amino-3-azabicyclo[3.3.0]octane hydrochloride
KG-1细胞，细胞 人细胞,Hep3B2.1-7细胞 CL-0032BEL-7404(人细胞)5×106cells/瓶×2川楝素(标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Toosendanin

叙利亚仓鼠肾细胞;BHK-21川芎嗪(标准品)质量规格：HPLC≥98%,标准品Tetramethylpyrazine

F11R Others Human 人 JAM-A 人细胞裂解液 (阳性对照) 川芎嗪质量规格：≥98%,BRTetramethylpyrazine

外周血白细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)川续断皂苷VI；木通皂苷D（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Asperosaponin Ⅵ

CD300A Others Human 人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 人细胞裂解液 (阳性对照) 赤芝酸E质量规格：HPLC≥97%Lucidenic acid E
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。