PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：猴型逆转录病毒PCR检测试剂盒供应使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

6-Aminouracil  873-83-6  中文名：6-氨基尿嘧啶  分子式：C4H5N3O2    （）测试盒   Glycosylated hemoglobin () test kit

4-Aminosalicylic acid  65-49-6  中文名：4-氨基水杨酸  分子式：C7H7NO3    肝/肌糖元测试盒   Liver / muscle glycogen test kit

3-Amino-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one  4149/6/8  中文名：3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮  分子式：C9H9N3O    β-葡萄糖酸苷酶测试盒   Beta - glucose - acid - enzyme test case

2-Amino-5-nitrothiazole  121-66-4  中文名：2-氨基-5-硝基噻唑  分子式：C3H3N3O2S    红细胞NADH高铁血红蛋白还原酶测试盒   Erythrocyte NADH high iron hemoglobin reductase test kit              

1-Amino-2-methylanthraquinone  82-28-0  中文名：1-氨基-2-甲基蒽醌  分子式：C15H11NO2    碳酸氢   500g
兔粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rabbit GM-CSF)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  5-[Bis(2-hydroxyethyl)amino]-1-methyl-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  3543-74-6  中文名：  分子式：C18H27N3O4  度：98.0%  关键词： 

兔粒细胞集落刺激因子elisa试剂盒   兔粒细胞集落刺激因子试剂盒   规格型号：96T/48T   兔粒细胞集落刺激因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔粒细胞集落刺激因子试剂盒、兔粒细胞集落刺激因子elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。     5-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  中文名：5-氨基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO3S 

兔粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  5,6-Dimethyl-2-Benzothiazolamine  29927-08-0  中文名：5,6-二甲基-2-苯并噻唑胺  分子式：C9H10N2S  度：98.0%  关键词： 

兔可溶性细胞间黏附分子1   英文名称：   Rabbit soluble Iercellular Adhesion Molecular 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   sICAM-1  4-Benzoyl-3-methyl-1-phenyl-5-pyrazolone  4551-69-3  中文名：4-苯甲酰基-3-甲基-1-苯基-5-吡唑啉酮  分子式：C17H14N2O2 

兔可溶性破骨细胞异化因子(rabbit RANKL)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  4-Androstenediol  1156-92-9  中文名：4-雄烯二醇  分子式：C19H30O2
猴型逆转录病毒PCR检测试剂盒供应NCI-H358(人非小细胞细胞) 5×106cells/瓶×2 PC-12(肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)富马酸酮替芬质量规格：>99%,BRKetotifen fumarate

CL-0464USMC(大鼠平滑肌细胞)5×106cells/瓶×2富马酸酮替芬(标准品)质量规格：HPLC>98%,标准品Ketotifen fumarate

CD44 Others Human 人 CD44 人细胞裂解液 (阳性对照) 倍他米质量规格：>98% Betamethasone

人肝内胆管上皮细胞RNAHIBEpiC miRNA5 μg倍他米（标准品）质量规格：HPLC>98% ,标准品Betamethasone

5637(HTB-9)细胞，人细胞 大鼠细胞(癌细胞接种到肝脏成瘤),Walker-256细胞 MLF, 小鼠成纤维细胞比阿培南质量规格：度>97%Biapenem
人真皮成纤维母细胞-HDF-a2'-(二苄氨基)-6'-(二乙氨基)荧烷(>98.0%(HPLC)(T))质量规格：>98.0%(HPLC)(T)2'-(Dibenzylamino)-6'-(diethylamino)fluoran

CGB5 Others Human 人 CGB5 人细胞裂解液 (阳性对照) 3',6'-二甲氧基荧烷(>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)3',6'-Dimethoxyfluoran

家兔骨髓间充质干细胞;2012083MSC1,1'-亚甲基二-2-萘酚(>97.0%(GC))质量规格：>97.0%(GC)1,1'-Methylenedi-2-naphthol

二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞;CHO/dhFr- 细胞，TE-11细胞 B82细胞，鼠细胞系2-萘基苄基(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)Benzyl 2-Naphthyl Ether

B16-F10, 小鼠色素瘤高转移细胞 Mouse5-溴吲哚 质量规格：>99%5-Bromoindole
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。