PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：塔卡里伯病毒PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Aminophenazone  中文名：  分子式：C13H17N3O    脂褐质（不包括比色）检测   Free fatty acids (NEFA) detection               

Ambroxol   中文名：盐酸氨溴索  分子式：C13H19Br2ClN2O    组织因子   英文名称：    tissue factor   规格：   48T/96T   英文缩写：   TF

Ambrisentan  中文名：安倍生坦  分子式：C22H22N2O4    组织因子抑制物   英文名称：    tissue factor protein inhibitor   规格：   48T/96T   英文缩写：   TFPⅠ

Altrenogest  中文名：烯丙孕素  分子式：C21H26O2    转移生长因子-α   英文名称：   Ttansforming Growth Factor α   规格：   48T/96T   英文缩写：   TGF-α

alpha-Terthienylmethanol  中文名：  分子式：C13H10OS3    转移生长因子-β1   英文名称：   Ttansforming Growth Factor β1   规格：   48T/96T   英文缩写：   TGF-β1
兔子球蛋白M(IgM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  7-Methoxy-1-tetralinone  6836-19-7  中文名：  分子式：C11H12O2 

兔子球蛋白M(IgM)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  1,3-Bis(4-aminophenoxy)benzene  2479-46-1  中文名：1,3-双(4-氨苯氧基)苯  分子式：C18H16N2O2  度：98.0%   

兔子球蛋白Gelisa试剂盒   兔子球蛋白G试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子球蛋白G试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子球蛋白G试剂盒、兔子球蛋白G elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  8-Hydroxyodoroside A  176519-75-8  中文名：  分子式：C30H46O8  度：96.0%  关键词：  夹竹桃; 强心苷; 甾苷; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

兔子球蛋白Gelisa试剂盒   兔子球蛋白G试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子球蛋白G试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子球蛋白G试剂盒、兔子球蛋白G elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  8-Hydroxyhyperforin 8,1-hemiacetal  59014-02-7  中文名：  分子式：C35H52O5  度：%  关键词：  贯叶连翘; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

兔子球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  8-Phenyloctanoic acid  26547-51-3  中文名：8-苯基辛酸  分子式：C14H20O2
塔卡里伯病毒PCR检测试剂盒直销Ke-3 人细胞外消旋马来酸噻吗洛尔质量规格：美国进口rac Timolol Maleate

MDA-MB-436人腺癌细胞 MDA-MB-436 human breast adenocarcinoma cells L-15培养基+10%FBS(R)-(+)-马来酸噻吗洛尔质量规格：美国进口(R)-(+)-Timolol Maleate

FAM3C Protein Human 重组人 FAM3C / ILEI 蛋白 (Fc 标签)(S)-(-)-马来酸噻吗洛尔质量规格：美国进口(S)-(-)-Timolol Maleate

小鼠雪旺细胞(MSC)(5×105) MDA-MB-231, 人癌细胞 Human替硝唑标记d4质量规格：美国进口Tinidazole Labeled d4

中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆);CHO-K1外消旋α-羟基布洛芬质量规格：美国进口rac α-Hydroxy Ibuprofen
大鼠癌细胞;SHZ-889-芴甲基-N-琥珀酰亚基碳酸酯，英文名或英文缩写：FMOC-OSU，级别：BR，99%，规格：10克

BMPR2 Others Human 人 BMPR-II 人细胞裂解液 (阳性对照) α-L-岩藻糖苷酶 α-L-Fucosidase (1.8u/mg) 9037-65-4 1U 通用试剂

人膀胱基质成纤维细胞总RNAHBdSF NA加醋-D FORMIC cCID C-D 917-71-2

ATF2 Others Human 人 ATF2 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) Chloroauricacidhydrated四水合录金酸5毫克基准试剂，99.95%

中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO Hu 164 SCF 17(L-丝酸)
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。