PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：嗜热链球菌PCR检测试剂盒说明书使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Adefovir dipivoxil  142340-99-6  中文名：阿德福韦酯  分子式：C20H32N5O8P  度：98.0%  关键词：    小鼠抗内膜抗体elisa试剂盒   小鼠抗内膜抗体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠抗内膜抗体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠抗内膜抗体试剂盒、小鼠抗内膜抗体elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  

Adefovir  106941-25-7  中文名：阿德福韦  分子式：C8H12N5O4P  度：98.0%  关键词：    小鼠可溶性肌球蛋白重链2(sMHC-2)ElisaKit   ELISA.   96T/48T

Acyclovir  59277-89-3  中文名：阿昔洛韦  分子式：5O3  度：99.0%  关键词：    小鼠可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)ElisaKit   ELISA.   96T/48T

Acid Black 1  1064-48-8  中文名：酸性黑 1  分子式：C22H14N6Na2O9S2  度：99.0%  关键词：    小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Acetylatractylodinol  61582-39-6  中文名：乙酰苍术素醇  分子式：C15H12O3  度：97.5%  关键词：  抗菌; ; 苍术; 聚乙炔; 中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库  小鼠紧张素转化酶(ACE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
兔子睾elisa试剂盒   兔子睾试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子睾试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子睾试剂盒、兔子睾elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  8-Azaguanine  134-58-7  中文名：8-氮杂鸟嘌呤  分子式：C4H4N6O 

兔子睾elisa试剂盒   兔子睾试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子睾试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子睾试剂盒、兔子睾elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  8-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  119-28-8  中文名：8-氨基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO3S 

兔子睾(T)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           7-Amino-4-methylcoumarin  中文名：7-氨基-4-甲基香豆素  分子式：C10H9NO2 

兔子睾(T)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  7-Chloro-1,2,3,4-tetrahydrobenzo[b]azepin-5-one  中文名：  分子式：C10H10ClNO  度：98.0%

兔子高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              7-Benzyloxyindole  中文名：7-苄氧基吲哚  分子式：C15H13NO
嗜热链球菌PCR检测试剂盒说明书LY9 Others Mouse 小鼠 Ly9 / CD229 / SLAMF3 人细胞裂解液 (阳性对照) 对叶百部碱（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Tuberstemonine

小鼠T细胞瘤细胞;Cyc-Tag(S49)莪术醇(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Curcumol

CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人细胞裂解液 (阳性对照) 莪术二酮（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Curdione

U251人细胞 Human glioma cell line U251 DMEM+10% FBS蒽醌(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Anthraquinone

U251细胞，人神经细胞 滑假丝酵母 人海马趾神经元RNAHN-h miRNA5 μg对称N,N-二甲基精氨酸质量规格：>95%(2S)-2-amino-5-[(N,N'-dimethylcarbamimidoyl)amino]pentanoic acid
IL2RA Others Cynomolgus 食蟹猴 IL2RA 人细胞裂解液 (阳性对照) 基磺酸shēng huà shì jì容量：100毫克

CM-H098人真皮微内皮细胞完全培养基100mL录磺酰异青醋酯 Chlorosulfonyl isocycnctq 1189-71-2

BGC-803细胞，人细胞 人细胞,HOS细胞 人脐内皮细胞;HUV-EC盐酸胍 (分子生物级) Guanidine hydrochloride (for molecular... 1950-1-1 100G 通用试剂

EL4(小鼠瘤细胞) 5×106cells/瓶×2N-三(羟甲基)甲基-2-基乙磺酸钠盐shēng huà shì jì容量：保存：-20℃50/300ul/支

BSG Others Human 人 CD147 / EMMPRIN / Basigin 人细胞裂解液 (阳性对照) DTE 1g/5g/25g原装 Amresco 0425
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。