PCR实验方法步骤：

方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。
3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

技术服务内容：

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

特点优势：
1. 特异性：极细密螺旋体PCR检测试剂盒直销使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。
 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。
3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。
4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。
5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

Atractylodin  55290-63-6  中文名：苍术素  分子式：C13H10O    Humanai-ribosomalPproteinaibody,ARPA/Rib-PELISAKit 人抗核糖体P蛋白抗体(ARPA/Rib-P)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Crenulatin  63026-02-8  中文名：大花红天素  分子式：C11H20O6    HumanD-Dimer,D2DELISA试剂盒人D二聚体(D2D)ELISA试剂盒规格：96T/48T

1-Monopalmitin  542-44-9  中文名：1-棕榈酸单甘油酯  分子式：C19H38O4    组织IRAK1激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

Ethyl β-D-apiofuranoside  1932405-61-2  中文名：  分子式：C7H14O5    Humanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit人纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Myricadenin A  1612239-23-2  中文名：  分子式：C39H40O17    兔子调节蛋白(TM)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
兔组织因子途径抑制物(TFPI)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  2,2-Diphenylglycine  中文名：  分子式：C14H13NO2  度：98.0%

兔组织因子elisa试剂盒   兔组织因子试剂盒   规格型号：96T/48T   兔组织因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔组织因子试剂盒、兔组织因子eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Allopurinol  315-30-0  中文名：别嘌醇  分子式：C5H4N4O  度：98.0%  关键词： 

兔组织因子   英文名称：   Rabbit Tissue Factor   规格：   48T/96T   英文缩写：   TF  Allitol  488-44-8  中文名：蒜糖醇  分子式：C6H14O6  度：%  关键词：  中药对照品; 中药标准品; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

兔组织金属蛋白酶抑制因子1   英文名称：   Rabbit Tissue Inhibitor of Metalloproteinases 1   规格：   48T/96T   英文缩写：   TIMP-1  Allitol  488-44-8  中文名：蒜糖醇  分子式：C6H14O6 

兔子组织因子(TF)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装  Allyl cinnamate  1866-31-5  中文名：肉桂酸烯丙酯  分子式：C12H12O2
极细密螺旋体PCR检测试剂盒直销IL17RA Others Rat 大鼠 IL17RA / IL17R 人细胞裂解液 (阳性对照) 耐斯糖（标准品）质量规格：含量测定NISTOSE

原代肾实质细胞特制无血清添加剂Many types of cells包装：1ml对羟基苯乙酮（标准品）质量规格：供含量测定用4'-Hydroxyacetophenone

OS-732细胞，细胞(瘤株) 人细胞,SiHa细胞 人脊髓星形胶质细胞总RNAHA-sp NA3,29-二苯甲酰基栝楼仁三醇（标准品）质量规格：含量测定3,29-Dibenzoyl rarounitriol

非洲绿猴肾细胞系/IgR;VERO/IgR牛磺猪去氧胆酸（标准品）质量规格：含量测定TAUROHYODEOXYCHOLIC ACID  SALT

FZD5 Others Human 人 Frizzled-5 人细胞裂解液 (阳性对照) 苦玄参苷X（标准品）质量规格：HPLC≥97%,标准品Picfeltarraenin X
CRT细胞，神经细胞 曲霉 人海马趾星形胶质细胞RNAHA-h miRNA5 μg2-Octanol2-辛醇25克AR，97%

RTE(大鼠气管上皮细胞) 5×106cells/瓶×21,12-十八烷二醇 1,12-OCTcDqCcNqDIOL 76-73-0

HBL-100(人整合SV40基因的上皮细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0361HPAC(人胰腺腺泡上皮癌)5×106cells/瓶×2 水牛皮肤成纤维样细胞;WB-S2肖醋锰50%溶液 Mcngcnous nitnctq hqxchydrctq 17141-63-8

人肺粘液上皮样癌细胞;NCI-H2921-Pentadecanol1-十五醇500克CP，98%

人表皮角质细胞-(HEK-a) ( 5×105 )LB肉汤LB Broth (Lennox)
反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。