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实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μ进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

特点优势：

1. 特异性：核酸释放剂(DNA-RNA通用型)使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过GenBank及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。

 2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。

3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。

4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。

5.   优势1：序列资源丰富，除GenBank公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。

反应五要素：

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：

①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。

②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数*个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

柠檬酸三甲酯(>98.0%(GC))  Trimethyl   质量规格：>98.0%(GC) 英文名称HumanCINC-2a/bELISAKit人CINC-2a/b规格：96T/48T

柠檬酸三丙酯(>97.0%(T))  Tripropyl   质量规格：>97.0%(T) 英文名称HumanCINC-3ELISAKit人CINC-3规格：96T/48T

N-丁基苯磺酰胺(>98.0%(HPLC)(N))  N-Butylbenzenesulfonamide  质量规格：>98.0%(HPLC)(N) 英文名称HumanCKMBELISAKit人激动异构酶MB(CKMB)规格：96T/48T

D-(+)-樟脑(>98.0%(GC))  (+)-Camphor  质量规格：>98.0%(GC) 英文名称HumanCoicoseroneELISAKit人皮质同(Coicoserone)规格：96T/48T

阿卡波糖十三醋酸酯  Acarbose Tridecaacetate   质量规格：美国进口 英文名称HumanCoisolELISAKit人皮质醇(Coisol)ELISAKit规格：96T/48T

阿昔洛韦钠盐  Acyclovir    质量规格：美国进口 英文名称HumanCollageypeIELISAKit人I型胶原(CollageypeI)规格：96T/48T

阿昔洛韦单盐  Acyclovir Monophosphate   质量规格：美国进口 英文名称HumanCollageypeIIELISAKit人II型胶原(CollageypeII)ELISAKit规格：96T/48T

阿昔洛韦-d4  Acyclovir-d4   质量规格：美国进口 英文名称HumanCollageypeIIIELISAKIT人III型胶原(Collagen)ELISAKIT规格：96T/48T

N2-乙酰基-9-（2-乙酰氧基乙氧基甲基）鸟嘌呤（阿昔洛韦杂质）  N2-Acetyl-9-(2-acetoxyethoxymethyl)guanine (Acyclovir Impurity)  质量规格：美国进口 英文名称HumanconnectivetissuegrowthfactorELISAKit人结缔组织生长因子(ctgf)ELISA试剂盒规格：96T/48T

腺苷3′,5′-环单硫代酯，8-氯-,Rp-异构体钠盐  Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphorothioate, 8-Chloro-, Rp-Isomer,  Salt   质量规格：美国进口 英文名称HumanCPAFELISAKIT人衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)规格：96T/48T
兔子纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISAKit     Acetophenone tosylhydrazone  中文名：苯乙酮对甲苯磺酰基腙  分子式：C15H16N2O2S  度：98.0%

核酸释放剂(DNA-RNA通用型)兔子纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  1-chloro-6-(5-ethynylthiophen-2-yl)hexa-3,5-diyn-2-ol  中文名：  分子式：C12H7ClOS  度：%

兔子纤溶酶原elisa试剂盒   兔子纤溶酶原试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子纤溶酶原试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子纤溶酶原试剂盒、兔子纤溶酶原eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Arbidol hydrochloride  131707-23-8  中文名：盐酸阿比朵尔  分子式：C22H26BrClN2O3S