产品分类

辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法
物品单位 品牌
帛科
  • 产地:国产
  • 型号:100管/48样
  • 货号:BK-S01321
  • 发布日期: 2022-04-19
  • 更新日期: 2022-09-22
产品详细说明
产地 国产
品牌 帛科
货号 BK-S01321
用途范围 仅供科研使用
英文名称
纯度 %
CAS编号
别名 辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒
规格 100管/48样
分子式
是否进口

基本信息:

产品名称

检测方法

规格

货号

辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法

微量法

100管/48样

BK-S01321

大鼠透明质酸结合蛋白(HABP)elisa检测试剂盒
大鼠透明质酸(HA)elisa检测试剂盒
大鼠铜蓝蛋白(CP)elisa检测试剂盒
大鼠同型半胱氨酸(Hcy)elisa检测试剂盒
大鼠铁蛋白(Ferritin)elisa检测试剂盒
商品介绍:

测定意义
辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的NADH经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成ATP的同时,形成大量的ROS,同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

特点:
(1)应用广泛
由于各种各样的无机物和有机物在紫外可见区都有吸收,因此均可借此法加以测定。到目前为止,几乎化学元素周期表上的所有元素(除少数放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)灵敏度高
由于相应学科的发展,使新的有机显色剂的合成和研究取得可喜的进展,从而对元素测定的灵敏度大大提高了一步。特别是由于多元络合物和各种表面活性剂的应用研究,使许多元素的摩尔吸光系数由原来的几万提高到几十万。相对于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和准确度一致公认是比较高的。不但在实际工作中光度法被广泛采用,在标准参考物质的研制中,它更受重视,很多光度分析法已制定成为标准方法。
(3)选择性好
目前已有些元素只要利用控制适当的显色条件就可直接进行光度法测定,如钴、铀、镍、铜、银、铁等元素的测定,已有比较满意的方法了。
(4)准确度高
对于一般的分光光度法来说,其浓度测量的相对误差在1-3%范围内,如采用示差分光度法测量,则误差往往可减少到千分之几。
(5)适用浓度范围广
可从常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(经预富集后)。
(6)分析成本低、操作简便、快速


实验方法学:
一、肝素的配制:
市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以 更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液样本的收集:
全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。
1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。
2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及枸橼酸钠。
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
ANTXR2 炭疽毒素受体2抗体
ATG4C 自噬相关蛋白4C抗体
APG5L 自噬蛋白5/细胞凋亡的特异性蛋白抗体
ARSA 芳基硫酸酯酶A抗体
ACA11 拟南芥ACA11抗体
AHA3 AHA3抗体(拟南芥)
Phospho-ATP1A1 (Ser23) 磷酸化钠钾ATP酶蛋白a1抗体
phospho-ASK1 (Ser83) 磷酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体
AADACL1 中性胆固醇酯水解酶1抗体
Astrocyte 人星形胶质细胞抗体
Aldolase A 醛缩酶A抗体
Annexin VI 膜粘连蛋白6抗体
beta-Amyloid(25-35) β淀粉样肽(25-35)抗体
Angiotensin I 血管紧张素I抗体
Adrenomedullin 肾上腺髓质素抗体(N端20肽)
Arfaptin 2 ADP核糖基化因子结合蛋白2抗体
AVPR2 精氨酸加压素受体2抗体
ASC 凋亡相关斑点样蛋白ASC抗体
Afadin 丝状肌动蛋白结合蛋白抗体
Antithrombin III  抗凝血酶3抗体
人胚肺成纤维细胞;WI-38 [WI38]
人脐静脉内皮细胞(人膀胱癌细胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV 304]
人胚肺成纤维细胞;MRC-5
人羊膜细胞;WISH
人二倍体细胞;HEL
人正常肝细胞;L-02
人胚肺细胞VA13细胞;WI-38 VA13亚系2RA
人胚肺二倍体细胞;HL
人肾皮质近曲小管上皮细胞;HK-2
人脐静脉内皮细胞;HUV-EC-C
人男性正常细胞;Hs68
人胚肾上皮细胞系;KiMA
人胚肺细胞系;KuMA
人永生化淋巴细胞;CNLMG-B5537LC
人类成纤维细胞系;CNLMG-B5537SKIN
人永生化淋巴细胞;CNLMG-B5538LC
人类成纤维细胞系;CNLMG-B5538SKIN
人肺转化细胞;AE1201
人胚肺成纤维细胞;MRC-5
人胚肺二倍体细胞;HEL-1
人胚肾二倍体细胞;HEK-2
人胚肺二倍体细胞;KMB-17
人胚肺二倍体细胞;HEL-2
辅酶ⅠNAD(H)含量测试盒微量法人胚胎皮肤成纤维细胞;HES
人皮肤成纤维细胞;HSAS4
人皮肤成纤维样细胞;HSF2
人胚胎成纤维样细胞;HEH2
操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。