产品分类

NS0 残留 DNA 检测试剂盒
物品单位 品牌
帛科
  • 产地:国产
  • 型号:50T
  • 货号:BK-P96321
  • 发布日期: 2022-10-12
  • 更新日期: 2022-10-12
产品详细说明
产地 国产
保存条件 详见说明书
品牌 帛科
货号 BK-P96321
检测方法 PCR法
CAS编号
保质期 详见说明书
规格 50T
适应物种 详见说明书
检测限
数量 1000
用途范围 仅供科研实验
标记物
纯度 %
样本
应用
是否进口

NS0 残留 DNA 检测试剂盒

(PCR-荧光探针法)

NS0 残留DNA 检测试剂盒是用于定量检测各种生物制品及药品的中间品、半成品和成 品中残留的 NS0 宿主细胞残留 DNA。

试剂盒利用 Taqman 探针法,定量检测样本中NS0 残留 DNA 。该方法具有速度快、 特异性高、  性能可靠且 检测限可达到 fg 级别。

试剂盒组份:

试剂

装量

贮存条

NS0 control DNA

40ul×1

-20oC

DNA dilution buffer

6ml ×1 

-20oC

2×Taqman master mix (+UNG/ROX)

0.75ml ×2

-20oC

1NS0 qPCR mix

0.3ml ×1

-20oC

RNase-Free H2O

1.5ml×1

-20oC

规格 100  反应

适用机型:

PRISM 7500 Real-Time PCR System (ABI)

StepOne Plus Real-Time PCR System (ABI)

LightCycler 480 (Roche)

AriaMX (Agilent Technologies)

CFX (BIO-RAD)


NS0 残留 DNA 检测试剂盒实验操作过程:

 

一、 NS0 DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备

试剂盒中提供的 DNA dilution buffer  NS0 control DNA 进行梯度稀释,稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul  3fg/ul。具体操作如下:           1.将试剂盒中的 NS0 control DNA  DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,轻微振荡混匀,简短快速离心。

2. 6 支干净 1.5ml 离心管,分别标记为 SD1 SD2 SD3 SD4 SD5 SD6。

3 ,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer 4, 2ul NS0 control DNA 加入 SD1 管中,  然后涡旋振荡混匀 5- 10S 后短时快速离心 5S,涡 旋振荡和快速离心各重复 3 次。

5,按表 2 依次进 6 次梯度稀释操作,稀释操作同步骤 4。

 2. NS0 control DNA 的稀释

 

释管

释体积

浓度

SD1

2ul NS0 control DNA+198ul DNA dilution buffer

300 pg/ul

SD2

20ul SD1+180ul DNA dilution buffer

30 pg/ul

SD3

20ul SD2+180ul DNA dilution buffer

3 pg/ul

SD4

20ul SD3+180ul DNA dilution buffer

300 fg/ul

SD5

20ul SD4+180ul DNA dilution buffer

30 fg/ul

SD6

20ul SD5+180ul DNA dilution buffer

3 fg/ul

qPCR 结果分析(以 ABI 7500 为例)

1. Results  Amplification  plot 面板中, Threshold 设置为 0.05 ,点击 Analyze,此时可 初步查看扩增曲线的形态是否正常。

2. Results  Plate 面板中,将标准曲线孔的 Task 一栏设置为 Standard,并且在 Quantity 一栏分别赋值为 3000 、300 、30 、3 、0.3 0.03 (含义为每孔的 DNA 量, 单位为 pg), 并且 在相应  Sample Name 一栏命名为 SD1 SD2 SD3 SD4 SD5 SD6。

3. Results  Plate 面板中,将无模板对照 NTC 孔的 Task 一栏设置为 NTC,将阴性质控NEG 孔、待测样本孔、样本 ERC 孔的 Task 一栏设置为 Unknown,并且在相应的 Sample Name 一栏中命名为 NTC 、NEG 、S 、ERC ,之后点击开始键。

4. Results  Standard Curve  面板中,可读取标准曲线的斜率(Slope)、截距(Intercept)、R2

 

5. Results  Report 面板中, Mean Quantity 一栏可读取无末班对照 NTC、阴性质控 NEG、 待测样本、样本 ERC 的检测值。后续可在检测报告中将单位换算为 pg/ml  样本。

 

注:根据待测样本和样本 ERC 的检测结果计算加样回收率,加样回收率要求在 50%- 150%之 间。