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NS0 残留 DNA 检测试剂盒

(PCR-荧光探针法)

NS0 残留DNA 检测试剂盒是用于定量检测各种生物制品及药品的中间品、半成品和成 品中残留的 NS0 宿主细胞残留 DNA。

本试剂盒利用 Taqman 探针法，定量检测样本中NS0 残留 DNA 。该方法具有速度快、 特异性高、  性能可靠且 检测限可达到 fg 级别。

试剂盒组份：

规格 ：100  反应

适用机型：

PRISM 7500 Real-Time PCR System (ABI)

StepOne Plus Real-Time PCR System (ABI)

LightCycler 480 (Roche)

AriaMX (Agilent Technologies)

CFX (BIO-RAD)

NS0 残留 DNA 检测试剂盒实验操作过程：

一、 NS0 DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备

用试剂盒中提供的 DNA dilution buffer 将 NS0 control DNA 进行梯度稀释，稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、  3fg/ul。具体操作如下：           1.将试剂盒中的 NS0 control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化，待完全融化后，轻微振荡混匀，简短快速离心。

2.取 6 支干净的 1.5ml 离心管，分别标记为 SD1 ，SD2 ，SD3 ，SD4 ，SD5 ，SD6。

3 ，SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer，其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer。 4,取 2ul NS0 control DNA 加入 SD1 管中，  然后涡旋振荡混匀 5- 10S 后短时快速离心 5S，涡 旋振荡和快速离心各重复 3 次。

5,按表 2 依次进行 6 次梯度稀释操作，稀释操作同步骤 4。

表 2. NS0 control DNA 的稀释

qPCR 结果分析(以 ABI 7500 为例)

1.在 Results 的 Amplification  plot 面板中， 将 Threshold 设置为 0.05 ，点击 Analyze，此时可 初步查看扩增曲线的形态是否正常。

2.在 Results 的 Plate 面板中，将标准曲线孔的 Task 一栏设置为 Standard，并且在 Quantity 一栏分别赋值为 3000 、300 、30 、3 、0.3 、0.03 (含义为每孔的 DNA 量， 单位为 pg)， 并且 在相应 的 Sample Name 一栏命名为 SD1 、SD2 、SD3 、SD4 、SD5 、SD6。

3.在 Results 的 Plate 面板中，将无模板对照 NTC 孔的 Task 一栏设置为 NTC，将阴性质控NEG 孔、待测样本孔、样本 ERC 孔的 Task 一栏设置为 Unknown，并且在相应的 Sample Name 一栏中命名为 NTC 、NEG 、S 、ERC ，之后点击开始键。

4.在 Results 的 Standard Curve  面板中，可读取标准曲线的斜率(Slope)、截距(Intercept)、R²

5.在 Results 的 Report 面板中， Mean Quantity 一栏可读取无末班对照 NTC、阴性质控 NEG、 待测样本、样本 ERC 的检测值。后续可在检测报告中将单位换算为 pg/ml  样本。

注:根据待测样本和样本 ERC 的检测结果计算加样回收率，加样回收率要求在 50%- 150%之 间。