可以从形态观察、功能特征、分子标志物三个维度,综合判断小鼠原代气管上皮细胞是否出现接触抑制或老化:
接触抑制的判断特征
形态表现:细胞铺满培养表面后,相互紧密接触形成完整的单层铺路石样结构,不会出现细胞堆叠、多层堆积的现象,细胞排列规整有序,没有交叉重叠生长的情况。
功能特征:细胞完全长满后,增殖活动明显停滞,不再继续分裂,培养基的消耗速度显著变慢,培养基颜色长时间保持稳定,不会快速变黄。
细胞老化的判断特征
形态表现:细胞体积明显变大、形态变得扁平不规则,胞质内出现大量深色颗粒和空泡,细胞边界模糊,不再维持典型的透亮多角形上皮形态,漂浮死细胞数量明显增多。
功能特征:细胞完全失去增殖能力,Ki67、EdU等增殖标记物检测几乎呈阴性,传代后贴壁率极低,几乎无法恢复生长。
分子与染色验证:使用SA-β-gal衰老染色,阳性细胞会呈现明显蓝色;同时WB或qPCR检测可见p16、p21等衰老相关周期抑制因子的表达量显著上调。