上皮细胞膜蛋白2抗体的生物素化标记实验要点

上皮细胞膜蛋白2抗体的生物素化标记实验要点：
1.如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/L硼酸缓冲液充分透析；
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选最适条件；
3.用NHSB量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活；
4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此时可加入去污剂如 Triton x-100, Tween20等；
5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生物素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性；
6.生物素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及苯酚基,也可与糖基共价结合；
7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生物素会对生物素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用；

8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。

抗体制备过程：
1.材料与试剂
a．提取的动物 Ig
b．弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂
c．青霉素和链霉素
d．实验动物 兔
e．其它材料及试剂
2、选择实验活体。
3、进行动物免疫实验。
4、试取血样进行测试，查看免疫效果。
5、如果免疫成功，杀死实验活体，采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。胎牛血清（无菌采制）
酰基辅酶A结合结构域蛋白4抗体
α/β水解酶4抗体
ADCK2蛋白抗体
乙醛脱氢酶16家庭A1抗体
粘附分子IgG样结构域蛋白3抗体
乙醇脱氢酶1抗体
δ氨基乙酰丙酸脱水酶抗体
肌萎缩侧索硬化症相关蛋白4抗体
α2巨球蛋白(α-2M)抗体
ACCSL蛋白抗体
甲胎蛋白抗体
β淀粉样前体蛋白结合蛋白3抗体
星形肌动蛋白抗体
系统性红斑狼疮相关蛋白TREX1抗体
磷酸化系统性红斑狼疮先关蛋白TREX1抗体
磷酸化系统性红斑狼疮相关蛋白TREX1抗体
接头相关蛋白复合体AP-2μ链1抗体
磷酸化接头相关蛋白复合体AP-2μ链1抗体
膜粘连蛋白7抗体
3号染色体开放阅读框15抗体
载脂蛋白B受体抗体
三磷酸腺苷结合盒转运蛋白2抗体
载脂蛋白B抗体
花生四烯酸15脂氧合酶2抗体
载脂蛋白C4抗体
低密度脂蛋白受体衔接蛋白抗体