在完成小鼠原代肾动脉平滑肌细胞的分离后，需重点关注细胞培养的稳定性和功能维持。首先，将分离的细胞以适当密度（建议1×10?/cm2）接种于预涂胶原蛋白的培养皿中，使用含20%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素的DMEM/F12培养基，置于37℃、5% CO?的恒温培养箱中。24小时后更换为含10% FBS的维持培养基，以降低增殖速率，促进收缩表型表达。
关键操作提示：
1. 换液频率：每48小时换液一次，避免频繁扰动导致细胞脱落。若观察到细胞碎片增多，可先用PBS轻柔冲洗后再补液。
2. 传代控制：细胞融合度达80%时需传代，使用0.25%胰酶-EDTA消化30秒后立即用含血清培养基终止。原代细胞建议传代不超过3次，以免表型丢失。
3. 功能验证：可通过α-SMA免疫荧光染色（阳性率应＞90%）及血管紧张素Ⅱ刺激实验（钙离子荧光探针检测）确认细胞收缩特性。
常见问题应对：
- 细胞贴壁不良：检查胶原包被时间（需≥2小时）或尝试添加纤连蛋白（10μg/mL）。
- 自发分化：若出现长梭形形态改变，可添加5ng/mL TGF-β1维持表型。
最后，建议冻存早期代次细胞（使用含10% DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存），为后续实验保留一致性样本。通过规范操作和定期检测，可确保该模型在高血压或血管重塑研究中的可靠性。
