抗体验证是生物实验中的关键环节，其活性直接影响研究结果的可靠性。以下是几种常用的活性验证方法及其注意事项：
一、ELISA（酶联免疫吸附实验）
?原理?：通过显色反应判断抗体与目标蛋白的结合能力，显色越深，活性越高。
?操作要点?：
用已知抗原包被微孔板，加入待测抗体孵育。
加入酶标二抗，显色后测OD值，OD值越高，活性越好。
?适用场景?：快速筛选抗体批次，适合高通量检测。
二、Western Blot（蛋白质印迹法）
?原理?：通过特异性抗体检测目标蛋白，条带清晰、位置正确即表明活性良好。
?操作要点?：
提取蛋白，SDS-PAGE电泳分离后转膜。
用待测抗体孵育，显色后观察条带。
?适用场景?：验证抗体的特异性，尤其适合复杂样本。
三、其他方法（按需选择）
?免疫荧光（IF）?：通过荧光信号定位抗体在细胞中的结合位置，适合细胞水平验证。
?免疫沉淀（IP）?：富集目标蛋白后检测，适合验证抗体在天然状态下的活性。
四、注意事项
?样本处理?：避免反复冻融，使用蛋白酶抑制剂防止降解。
?对照设置?：一定要设阳性/阴性对照，确保结果可靠。
?设备校准?：定期维护仪器，保证检测准确性。
