诱导培养基和增殖培养基的配制需基于植物种类、外植体类型及实验目标进行精准设计,但其核心流程一致:?以合适的基础培养基为载体,添加特定比例的植物生长调节剂,并严格控制理化条件。以下是系统性配制方法:
一、通用配制流程(适用于大多数植物组织培养)
无论诱导或增殖阶段,培养基配制均遵循以下步骤:
计算与称量
根据目标培养基配方,精确称取大量元素、微量元素、铁盐、维生素、蔗糖、琼脂及植物激素。
溶解与混合
将各成分依次加入约2/3体积的蒸馏水中,加热搅拌至完全溶解(琼脂需加热熔化)。
调节pH值
使用0.1 mol/L NaOH或HCl将培养基pH调整至5.8(多数植物适宜范围为5.6–6.0)。
定容与分装
加蒸馏水定容至所需体积,分装入三角瓶或试管中。
加塞包扎与灭菌
用棉塞封口,外包牛皮纸,采用高压蒸汽灭菌(121℃、0.103 MPa,维持15–20分钟)。
无菌检查与保存
灭菌后于37℃恒温培养24–48小时确认无菌,随后置于2–8℃避光保存备用。
关键提示:激素应在灭菌前加入,但对热敏感的物质(如某些抗生素)可在冷却至约60℃时再添加。
二、诱导培养基的特异性配制要点
诱导培养基的核心是?启动细胞脱分化或器官发生,常用于外植体初代接种。
常见配方结构:
基础培养基:MS培养基最常用,营养全面。
植物激素组合:
细胞分裂素(如6-BA):0.5–2.0 mg/L,促进芽原基形成;
生长素(如NAA或2,4-D):0.1–0.5 mg/L(诱导芽),或更高浓度用于愈伤组织诱导。
附加成分:蔗糖30 g/L,琼脂6–7 g/L(固体培养基)。
三、关键差异总结
实践建议:可通过预实验优化激素配比,结合外植体响应动态调整方案。
四、增殖培养基的特异性配制要点
增殖培养基旨在?高效扩增已形成的不定芽或丛生芽,强调繁殖系数与遗传稳定性。
常见配方结构:
基础培养基:MS或WPM,部分植物使用1/2MS以降低盐分抑制。
植物激素组合:
细胞分裂素(如6-BA):浓度?高于诱导阶段?(如3.0–4.0 mg/L),强烈促进腋芽萌发;
生长素(如NAA):浓度?低于诱导阶段(如0.1 mg/L),避免过度生根或愈伤化。
可选添加物:活性炭(0.02%)用于吸附有害代谢物,提高芽质量。