小鼠原代视网膜色素上皮细胞注意事项：
1.收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2.收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。
3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。
4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。续写内容：
5. 细胞传代时，建议使用预温的PBS轻柔洗涤2-3次，以彻底去除残留的培养基和血清成分，避免消化酶活性受影响。消化时间需严格控制，通常以0.25%胰酶（含EDTA）在37℃下作用1-2分钟为宜，镜下观察到细胞间隙增大、边缘收缩即可终止消化。过度消化可能导致细胞膜损伤，影响后续贴壁和增殖。
6. 原代视网膜色素上皮细胞（RPE）对培养基成分敏感，建议使用专用培养基（如DMEM/F12添加10%胎牛血清、1%非必需氨基酸及2mM L-谷氨酰胺），并每2-3天更换一次。若细胞出现生长迟缓或形态扁平化，可尝试添加5ng/mL bFGF以促进活力。换液时需保留1/3原培养基，避免环境骤变导致细胞应激。
7. 冻存复苏需注意梯度降温：4℃ 30分钟→-20℃ 2小时→-80℃过夜→液氮长期保存。复苏时需快速解冻，37℃水浴中轻摇至冰晶消失，立即转移至含10倍体积培养基的离心管中，低速离心后弃上清，重悬接种至预铺胶原蛋白的培养皿（密度建议5×10?/cm2）。前24小时避免频繁观察，减少扰动。
8. 功能性实验（如吞噬实验、屏障功能检测）建议在细胞传代后第3-5代进行，此时细胞形态稳定且功能成熟。若需诱导极化，可采用Transwell小室培养21天，定期检测跨膜电阻（TEER）值至稳定＞200Ω·cm2。操作时注意气液界面湿度控制，避免边缘效应影响数据准确性。
9. 定期进行STR鉴定和支原体检测，尤其长期培养时需每2个月验证一次。若发现细胞出现异常空泡化或颗粒增多，可尝试添加1%双抗处理48小时，并排查培养箱CO?浓度（保持5%）及湿度（95%）是否达标。建议建立不同批次的工作细胞库，避免实验中断风险。
